论文部分内容阅读
目的: 结直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤,是我国第三大最常见肿瘤,也是第五大癌症相关死亡原因,其发病原因很复杂。在我们课题组前期的研究中,通过代谢谱分析,发现结直肠癌代谢物中有一些物质含量发生了异常变化,或上升或降低,鹅脱氧胆酸(CDCA)就是其中一种。本研究的主要目的是为了探索鹅脱氧胆酸对结直肠癌细胞功能的影响,从而为结直肠癌的治疗提供一个新思路。 方法: 1、通过代谢组学技术,对健康对照组、结直肠癌良性组和结直肠癌恶性组中各种代谢物的含量进行分析。 2、用CCK-8法检测不同CDCA浓度下活细胞的OD值,通过改良蔻式法算出CDCA对结直肠上皮正常细胞株FHC、结直肠癌细胞株SW480和DLD-1的半抑制浓度,选出合适的作用浓度,进行后续试验。 3、根据筛选出的CDCA浓度,进行肿瘤细胞生物学特性实验,包括克隆形成实验、划痕实验和transwell小室迁移实验。 4、进行WB实验,检测相关凋亡蛋白的表达量。 5、细胞流式实验,检测不同药物浓度下细胞的凋亡情况。 6、线粒体功能实验,检测不同CDCA浓度对线粒体功能的影响,包括MMP、ROS和ATP的影响。 结果: 1、根据代谢谱结果,分析发现鹅脱氧胆酸的含量在健康对照组,结直肠癌良性组和结直肠癌恶性组中依次降低。 2、根据CCK-8筛选结果,计算得到正常结直肠细胞FHC的半抑制浓度为185μM,两株结直肠癌细胞系中,SW480细胞株的半抑制浓度为145μM,DLD-1细胞株的半抑制浓度为71μM,选定SW480细胞株的CDCA工作浓度为0μM、150μM、160μM和180μM;DLD-1细胞株的工作浓度为0μM、80μM、130μM和180μM。 3、肿瘤细胞生物学特性实验中,DLD-1细胞株的克隆形成能力随着CDCA浓度的增加而降低,划痕闭合速率随着CDCA浓度的增加而减慢;两株细胞的transwell小室迁移迁移能力也随着药物浓度增加而降低。 4、WB实验中,两株细胞系的凋亡蛋白Bax表达量随着药物浓度增加而上升,抗凋亡蛋白Bcl-xl表达量随着药物浓度增加而降低。 5、进行流式细胞术检测,发现两株细胞的凋亡细胞百分比随着药物浓度的增加而上升。 6、线粒体功能实验中,线粒体膜电位随着CDCA浓度升高而降低,线粒体ROS含量随着CDCA浓度上升而下降,而ATP产生量随着CDCA浓度上升而上升。 结论: 根据代谢谱结果,得到鹅脱氧胆酸在血清中的含量,在健康对照组,结直肠癌良性组和结直肠癌恶性组中依次降低,据此我们推测鹅脱氧胆酸的代谢异常可能跟结直肠癌的发生发展相关,因此鹅脱氧胆酸是一种潜在的结直肠癌生物标志物。根据代谢谱的结果,我们通过细胞水平,对鹅脱氧胆酸的作用进行了更深入的研究,包括肿瘤细胞生物学特性实验和细胞凋亡的检测,以及线粒体功能检测,发现鹅脱氧胆酸对结直肠癌细胞系的增殖,有明显的抑制作用,对细胞迁移也有抑制作用。根据细胞凋亡蛋白表达量的检测和流式细胞术结果,发现鹅脱氧胆酸能促进结直肠癌细胞株的凋亡。线粒体功能实验结果中,我们可以知道随着鹅脱氧胆酸浓度的增加,线粒体膜电位下降,线粒体膜的稳定性受到破坏。但是,线粒体的ROS含量却下降了,而ATP生成量却上升了,推测虽然线粒体膜受到破坏,但是可能有其他的代偿机制产生ATP。综上所述,鹅脱氧胆酸具有抑制结直肠癌细胞增殖、迁移,促进凋亡的作用,有望为结直肠癌的治疗提供新思路。