液体发酵法生产香菇多糖关键技术的研究

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食用菌不仅营养丰富、味道鲜美,而且通常具有提高人体免疫力、抗肿瘤、抗氧化活性、抗衰老、降血糖、降血脂、降血压、抗病毒、抗辐射等医药保健功效。大量试验证明,食用菌中的主要功效成分是多糖。爪哇香菇作为众多食用菌中的一种,其多糖成分可能存在巨大的开发应用价值,而国内外对爪哇香菇的研究还处于明显的空白。本课题对适宜爪哇香菇生长的母种培养基、液体种子培养基、液体发酵培养基及发酵条件进行了初步的研究。爪哇香菇母种培养基筛选的研究通过单因素随机区组试验对10种马铃薯半合成培养基进行了筛选,以期从中筛选出菌丝生长旺盛,菌落边缘整齐、气生菌丝量正常、萌发快、日平均生长速度快,所需满管时间短的适宜扩种繁殖的母种培养基。结果表明,最适宜爪哇香菇菌丝生长的培养基分别为培养基A8:马铃薯20%,葡萄糖2%,麸皮2%,玉米粉2%,蛋白胨0.2%,MgSO47H2O0.05%,KH2PO40.1%,维生素B10.001%,琼脂2%和培养基A10:马铃薯20%,葡萄糖2%,麸皮5%,酵母膏0.25%,蛋白胨0.1%,MgSO47H2O 0.05%,KH2PO40.1%,琼脂2%。在爪哇香菇液体种子培养基的研究中,综合考虑培养基澄清度、菌球形态、菌丝球个数和菌体干重各项指标,首先从6种液体种子培养基中初筛出一种最适合爪哇香菇生长的培养基。然后在初筛的基础上,通过正交试验优化了该最适培养基的主要营养成分,即碳源和氮源。试验结果表明,最适合爪哇香菇生长的液体种子培养基为:玉米粉4%、蔗糖2.5%、酵母膏0.3%、KH2PO4 0.1%、MgSO47H2O 0.05%、维生素B10.005%、pH5.25。爪哇香菇液体发酵培养基的优化研究,以胞内多糖产量为指标,通过一系列单因素试验考察了碳、氮源种类及浓度对爪哇香菇菌丝体液体发酵产胞内多糖的影响。实验结果表明,选取2%葡萄糖和2.5%N溶性淀粉为最佳碳源,0.1%酵母膏为最适宜氮源。在此基础之上,又通过L9(34)正交试验确定了液体发酵培养基中KH2PO4、MgSO47H2O和维生素B1的最佳配比,试验结果表明,KH2PO4 0.1%、MgSO47H2O 0.05%和维生素B1 0.001%最有利于液体发酵爪哇香菇菌丝体产胞内多糖。最终优化出的适于爪哇香菇菌丝体液体发酵产胞内多糖的培养基为:2%葡萄糖、2.5%可溶性淀粉、0.1%酵母膏、KH2PO4 0.1%、MgSO47H2O 0.05%和维生素B1 0.001%。在优化了液体发酵培养基的基础之上,本课题又对适宜爪哇香菇菌丝体液体发酵的条件进行了系统的研究。通过一系列单因素试验考察了培养基起始pH、摇瓶装液量、摇床振荡频率以及培养天数对爪哇香菇液体发酵产胞内多糖的影响。试验结果表明,起始pH4~5、250ml三角瓶装液量50ml~100ml、摇床振荡频率130r/min、培养9天为宜。之后进一步通过L9(34)正交试验确定了接种量、培养温度、玻璃珠数量三个因素的最佳组合,试验结果表明接种量10%、培养温度28℃、玻璃珠数量10粒时是最佳的培养条件。在试验得出的最佳的发酵条件下培养爪哇香菇菌丝体所得到的胞内多糖产量达到869.46μg/ml。
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