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以红松(PinuskoraiensisSieb.et Zucc.)完整种仁及不同部位为外植体,进行体胚发生的相关研究,诱导红松胚性愈伤组织,同时比较外植体采集时间、无性系、蔗糖、生长调节剂浓度及CH对胚性愈伤组织诱导的影响。诱导出的胚性愈伤组织继代到增殖培养基中增殖,通过体胚发生途径获得体细胞胚。选取发育正常的体胚进行萌发,待体胚生根后移栽。(1)红松未成熟种仁可以诱导出胚性愈伤组织,且胚性愈伤组织在适宜条件下可以长期保持与增殖。胚性愈伤组织诱导外植体的适宜生理时期为原胚期,适宜培养基为DCR + 6-BA 1 mg/L+ NAA 2 mg/L+ 蔗糖 30 g/L+ Gln(L-谷氨酰胺)500 mg/L + CH(酸水解酪蛋白)500 mg/L+Agar(琼脂)6.5 g/L;红松愈伤组织保持与增殖阶段的适宜培养基为 DCR + 6-BA 0.25 mg/L+ NAA 1 mg/L+蔗糖 30 g/L+ Gln 500 mg/L + CH 500 mg/L+ Agar 6.5 g/L。胚性愈伤组织继代培养周期以15 d左右为宜,此时既能保持胚性愈伤组织的胚性,又能获得较大的增殖量;不同无性系之间胚性愈伤组织的保持与增殖能力存在很大差异。各生长调节物质组合对红松胚性愈伤组织增殖率影响差异显著,其中以2,4-D + 6-BA组合效果最好,但其增殖率仍低于NAA+6-BA组合。(2)红松未成熟种仁可以实现高频的胚性愈伤组织诱导体系,并且可以实现体胚发生与植株再生。愈伤组织诱导培养基为DCR + Agar 6.5 g/L+ Gln 500 mg/L +蔗糖30 g/L + NAA2 mg/L+ 6-BA 1.5 mg/L+ CH 800 mg/L;红松胚性愈伤组织的保持与增殖,以DCR 为基本培养基,附加蔗糖 30 g/L + 2,4-D 0.5 mg/L+ 6-BA 0.1 mg/L + CH 500 mg/L+Gln 500 mg/L + Agar 6.5 mg/L,继代周期为15d;体细胞胚胎发育与成熟适宜培养基为:DCR + 麦芽糖 40 g/L + ABA 20 m g/L+ 结冷胶(Gelrite)10 g/L + 活性炭 2 g/L+CH 500 mg/L + Gln 500 mg/L;体细胞胚的萌发培养基为:DCR +蔗糖25 g/L +活性炭2 g/L + Agar 6.5 g/L;当红松植株生长至3cm左右,转入生根培养基,WPM +蔗糖20 g/L + IBA 0.1 mg/L + Agar 6.5 g/L,植株再生率为13.3%;最后将再生植株移栽入营养土、蛭石及珍珠岩(质量比3:1:1)的花土中,植株成活率为46.6%。(3)红松成熟种仁可以诱导产生愈伤组织,诱导出的愈伤组织无论是从形态学角度还是细胞学角度均为胚性愈伤组织。但目前为止,红松成熟种子胚性愈伤组织增殖尚未成功,且尚未成功实现体胚发生。红松成熟种仁的不同部位愈伤组织诱导的适宜培养基为 DCR + 蔗糖 35 g/L + NAA 2.0 mg/L + 6-BA 1.5 mg/L + CH 500 mg/L + Gln 500 mg/L。在该培养基上愈伤组织诱导率最高、褐化率最低、生长状态最佳;在选出的优化培养条件下,8种来源的外植体中,从裸胚上切离的下胚轴的愈伤组织诱导率高、褐化率低、且增殖能力强,具备胚性愈伤组织的形态解剖特征。