拟南芥MATH结构域AtSb3基因的初步研究

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MATH结构域,由7个反向平行的p-螺旋折叠组成,能参与介导蛋白质之间相互作用。前期我们从油菜基因组克隆了6个编码MATH结构域的基因,其中一个命名为BnD12。为研究BnD12基因的功能,我们从拟南芥基因组中筛选出了一个与BnD12基因具有高度同源性的MATH结构域基因,命名为AtSb3,其功能未知。本研究通过生物信息学、分子生物学、反向遗传学等方法对AtSb3基因的功能进行了初步研究,获得了如下结果:1、对AtSb3基因进行生物信息学分析表明,该基因包含6个内含子,7个外显子,CDS全长1056bp,编码351个氨基酸,相对分子质量为39826.2D,理论等电点为9.21,编码含有两个连续的MATH结构域,其结构N端含有一个信号肽,预测存在跨膜结构,是一种亲水性分泌蛋白或者膜结合蛋白。2、用半定量RT-PCR方法分析AtSb3基因在拟南芥根、茎、叶、花、果荚中的表达情况,结果表明:AtSb3基因在根中表达,而在茎、叶、花和果荚中检测不到该基因的表达。3、克隆了AtSb3基因ATG上游的1690bp的启动子区,并对该序列进行启动子元件分析,发现该启动子区含有众多根特异表达相关元件和与抗性、胁迫相关的元件;构建了启动子GUS融合表达载体pAtSb3pro101::GUs;浸花法转化拟南芥并获得了转基因植株;通过对转基因植株进行GUS组织化学定位,结果表明AtSb3基因在胚根和成熟的根中特异表达,并且在成熟根的根冠与分生区细胞结合部位、以及伸长区和根毛区表达量高,而在伸长区与分生区之间存在一段不表达的区域。4、筛选到了AtSb3基因的纯合子突变体:sb3(T-DNA插入)和cs21(转座子插入)。纯合子突变体与野生型拟南芥相比较,在表型上没有明显差异。5、克隆了AtSb3基因的CDS全长,构建了过表达载体pBI121-35S::AtSb3,浸花法转化Col野生型拟南芥,半定量RT-PCR检测表明转基因植株中AtSb3基因都超量表达。
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