小鼠HCMV潜伏感染UL83基因载量与再激活机率相关性研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangyifan_18
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目的:本研究在用不同剂量人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染小鼠建立潜伏感染模型的基础上,观察HCMV在小鼠体内的主要潜伏部位和各潜伏部位HCMV基因组中长独特序列(UL)区第83个基因(UL83)载量以及再激活时相应部位UL83基因载量的变化,研究原发感染病毒量与潜伏病毒UL83基因载量的相关性,探讨再激活发生机率与潜伏感染UL83基因载量之间的关系,从而为临床预防免疫功能低下患者发生HCMV疾病寻找可靠诊断指标以及治疗和监测疗效提供新思路。方法:首先确定建立潜伏感染小鼠的HCMV剂量,再建立HCMV潜伏感染小鼠的模型。将60只6~8周龄SPF级BALB/c小鼠分为5组,每组12只,雌雄各半。A、B、C组为不同剂量病毒感染组:A组腹腔注射3.5×10~5PFU/ml HCMV 1.0ml/只;B 组腹腔注射3.5×10~5PFU/ml HCMV 0.75 ml/只;C组腹腔注射3.5×10~5 PFU/mlHCMV 0.5 ml/只。D组、E组为对照组:D组为DMEM对照组,腹腔注射DMEM液1.0 ml/只;E组为HF正常细胞对照组,腹腔注射正常HF细胞悬液1.0 ml/只。十四个月后将各组半数的小鼠处死,分别取小鼠肺、脑及外周血白细胞进行如下试验:(1)制备小鼠的肺、脑皮质匀浆及外周血白细胞进行病毒分离;(2)透射电镜下观察小鼠肺和脑组织有无病毒颗粒;(3)PCR检测HCMVUL83基因;(4)原位杂交检测HCMVUL83基因;(5)免疫荧光检测pp65蛋白表达;(6)实时荧光定量PCR检测HCMV UL83基因载量。同时对留下的小鼠进行免疫抑制干预,诱导潜伏HCMV的再激活。将每只小鼠称重,按150mg/kg的剂量给各组小鼠腹腔注射环磷酰胺,每隔6天注射一次,如此共注射3次,在最后一次注射后的第六天宰杀所有小鼠,取材及检测同前。结果:安徽医科大学硕士学位论文HCMV可以在小鼠体内建立潜伏感染状态并可被诱导再激活,而且,UL83基因是HCMV潜伏和再激活的标志性基因;肺、脑及外周血白细胞是HCMV的潜伏部位;各部位潜伏uL83基因载量有差异,肺uL83基因载量为8513士23leopies/10卜cells,与脑(250士1 seopies/lo6cells)和外周血白细胞(739士28c叩ies/IO6eells)有显著性差异(P<0.01),故肺是主要的潜伏部位。A组原发感染病毒量最高,则各部位潜伏病毒DNA的量最高,从而发生再激活的机率最大;B组感染病毒量次之,则潜伏病毒DNA的量及发生再激活的机率也小于A组;C组感染病毒量最低,则潜伏病毒DNA的量及发生再激活的机率也是最低。潜伏时再激活UL83基因载量与发生再激活时UL83基因载量及发生再激活机率的相关性分析表明:二者呈正相关,相关系数及P值分别为10.02(P<0.05)和8.65(P<0.05)。结论:原发感染病毒量决定潜伏UL83基因载量,而潜伏UL83基因载量又决定再激活发生的部位和机率。高水平HCMV原发感染可导致高水平UL83基因潜伏,高水平UL83基因潜伏则可导致再激活发生的高风险。潜伏UL83基因载量与发生再激活的机率呈正相关。
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