猪链球菌2型毒力相关蛋白的原核表达及体外试验评估重组蛋白的免疫源性和保护性

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猪链球菌2型(Streptococcus suis type2)是一种重要的人兽共患病原菌,猪链球菌的发病机制至今仍不十分清楚,能否研制出针对我国致病猪链球菌2型的有效疫苗和诊断试剂直接关系着猪链球菌病在我国的有效预防和控制。目前猪链球菌疫苗主要有3种类型:减毒活疫苗;已发现的毒力因子;具有免疫原性的细胞壁膜蛋白。本人所在的课题组应用免疫蛋白质组技术体系开展了一定的工作,目前已经鉴定了31个猪链球菌2型新的免疫原性抗原分子。在此基础上针对这些鉴定出的候选分子设计引物,以98江苏人源分离株98-149菌株基因组为模板,利用PCR技术扩增基因片段,定向克隆至pET232a(+)表达载体中。重组质粒经限制性酶切鉴定和测序,转化至大肠杆菌BL21,IPTG诱导后,获得了重组蛋白的高效表达。蛋白经过镍亲和层析柱层析,获得纯化的重组蛋白。使用Westen-blot验证了它们的免疫原性后以重组蛋白免疫Wistar大鼠,获得抗血清并测定滴度大于等于10~5。间接ELISA实验证明患者血清及免疫后猪血清中存在与重组蛋白相应的特异抗体。利用抗血清调理猪链球菌后进行的体外杀伤试验证明部分重组蛋白具有与公认的强毒力因子MRP相当的免疫保护作用。这些工作为发现新的保护性抗原,深入研究新的保护性抗原的可能生物学功能提供了重要的参考依据,为寻找与毒力密切相关的抗原作为重点研究和开发的疫苗候选分子等后续工作奠定了基础。
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