研究背景近二十多年来,侵袭性真菌感染在恶性血液病的发生率逐年提高,其中曲霉菌所致的感染已成为仅次于念珠菌感染的第二大深部真菌病。早期快速准确诊断和治疗可有效减少真菌耐药的发生,显著提高患者的生存率。然而,传统的血培养检查耗时较长且敏感性较低,影像学方法缺乏特异性,所以探索一种快速可靠检测曲霉菌感染的诊断方法已成为临床实验研究的热点问题。研究目的结合本课题组的前期研究,通过自行设计引物,建立与评价侵袭性曲霉菌病实时定量PCR诊断技术,以期为侵袭性曲霉菌病提供快速、准确的早期诊断方法为临床诊断提供参考。对收集的临床高度疑似曲霉菌感染病人的血标本进行单盲检测,评价其临床诊断效能。研究方法⑴利用Blast和DNAMAN软件工具在GeneBank数据库中查找黑曲霉、构巢曲霉的高度保守序列。对目的基因序列进行自行设计PCR引物;制备标准品并制定荧光PCR定量标准曲线,进行评价。⑵收集临床血液标本,进行DNA提取,并进行荧光PCR单盲检测,与实验室传统的血培养和GM实验检测结果进行比较分析。研究结果⑴:荧光PCR定量标准曲线:Y|^ =-3.538Χ+42.104,R2=0.9996(黑曲霉);Y|^ =-3.380Χ+43.474,R2=0.9990(构巢曲霉)。荧光PCR检测的批内和批间的变异系数小,重复性好,特异性高。⑵:与GM实验比较,荧光PCR可以检测到GM的假阴性,其敏感性较高。研究结论成功建立了侵袭性曲霉菌病荧光PCR诊断技术,具有较高的敏感度和特异度,重复性好。