双价抗病基因表达载体的构建及遗传转化

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植物抗病基因工程近年来已取得了很大的进展,利用转基因技术抗病基因转入植物是植物抗病育种的新途径.天麻抗真菌蛋白对二十几种真菌均有一定的抗性,该基因GAFP最近被克隆且原核表达产物也具有抑菌活性.我们将构建于植物表达载体的上GAFP基因通过农杆菌介导转入烟草.共获得146株完整的再生植株,其中一部分进行PCR和SouthernBlotting检测,证明GAFP已整合到烟草基因组中.NP1为兔防御素,具有抗细菌、真菌、病毒的能力.该论文第二部分将GAFP和NP1两个基因构建在同一个植物表达载体上:pBin35SGAFP-NP1和pBI35SGAFP-NP1-bar.在论文的第三部分我们将pBin35SGAFP-NP1通过根癌农杆菌LBA4404转化烟草.第四部分无们以美洲黑杨X小叶杨(PopulusdeltoidesXP.simonii)优良无性指法NL-80106S杨为受体材料,通过根癌农杆菌LBA4404(pBin35SGAFP-NP1)介导进行转化.得到36株完整的再生植株,经PCR和PCR-Southern分析表明,共获得17株转基因植株.这初步表明GAFP和NP1基因已整合到NL-80106基因组中.离体抑菌检测也初步证明两个基因得到表达.
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