论文部分内容阅读
目的：在骨科领域中,对于脊柱退行性疾病,其最终解决的是如何抑制椎间盘组织的退变和促使椎间盘组织的再生。目前椎间盘退变与再生研究领域的热点是对于基质蛋白多糖(PG)的研究,深入研究基质蛋白多糖(PG)在人椎间盘退变过程中的代谢(本课题主要研究合成)及其与各影响因素(本课题主要是研究静水压)之间的关系,对于人椎间盘退行性疾病的预防、诊断和治疗具有十分重要的意义。本研究课题是建立在国内外先进的研究方法基础之上,结合中西医治疗人椎间盘突出症的经验,从人腰椎间盘摘除术的志愿者中获取新鲜的椎间盘组织样品,以中药马钱子溶液通过体外培养在静水压下(1atm)对人腰椎间盘蛋白多糖(PG)合成进行干预,对获得的数据进行分析。如果在退变的人椎间盘组织蛋白多糖的合成中马钱子的作用得到明了,则提示可采用马钱子或马钱子复方制剂延缓椎间盘的退变过程,为临床上预防和延缓腰椎间盘退行性变开辟一条新的途径。
方法：实验一,将24孔培养板分成4组,分别是空白组即对照组Ⅰ(不添加马钱子溶液)；马钱子溶液低剂量组Ⅱ；马钱子溶液中剂量组Ⅲ；马钱子溶液高剂量组Ⅳ。探讨马钱子对蛋白多糖(PG)合成影响的最佳剂量。按分组要求椎间盘组织培养基中分别加入不同剂量的马钱子溶液,在1atm下,37℃培养2小时,然后取上清液,离心,重复取上清液,-20℃保存,待检测蛋白多糖(PG)含量。蛋白多糖(PG)含量检测：采用考马斯亮蓝蛋白定量检测法。分光光度仪于 595 nm波长处测定OD值。结果以g/L表示。实验二,按分组要求椎间盘组织培养基中加入不同剂量马钱子溶液、L-NMA及SNAP,在1atm的静水压下,37℃培养2小时后,然后取上清液,高速离心机离心,重复取上清液,-70℃保存,待检测蛋白多糖含量。这里我们采用的是考马斯亮蓝蛋白定量检测法,检测蛋白多糖含量,结果以g/L表示。然后用苏木精一伊红(HE)染色行组织学观察。最后行统计学分析,实验数据采用 ±s表示。采用t检验进行分析。P<0.05为有显著性差异。
结果：实验一结果：马钱子可以有效抑制人椎间盘髓核组织NO释放量,促进蛋白多糖(PG)的合成,而且有剂量依赖性。其中,低剂量组与空白组相比无显著性差异；中、高剂量组与空白组相比有显著性差异,其中中等剂量组中 2.5 mg∕ml差异最为明显(P<0.01)；高剂量组与中剂量组相比,其对NO释放量和蛋白多糖(PG)合成的影响较为降低,我们考虑随着药物剂量的增加,其可能对人椎间盘基质的代谢有一定的抑制作用,具体的药效学作用原理尚有待进一步研究。因此,适当剂量马钱子溶液可以促进人椎间盘髓核组织蛋白多糖(PG)的合成,从而延缓椎间盘的退变,其复杂的作用机制有进一步研究的必要。实验二结果：在培养基中添加中等剂量的马钱子溶液(2.5mg∕ml)后,NO产生量明显减少,蛋白多糖(PG)合成率明显增加。与在培养基中添加NO合成酶抑制剂(L-NM MA)相比无显著性差异(P>0.05),而与培养基中添加NO的供体(SNAP)相比有显著性差异(P<0.01),说明中等剂量马钱子溶液确实能够促进蛋白多糖(P G)的合成。
结论：中等剂量马钱子溶液(2.5mg∕ml)可以抑制人椎间盘髓核组织一氧化氮的释放量,促进蛋白多糖(PG)的合成,并且有剂量依赖性。