目的利用分子生物学、细胞生物学与蛋白质组学等相关技术研究绞股蓝总皂苷对HDL2诱导的HepG2细胞胆固醇摄取与蛋白质组的影响,阐明绞股蓝总皂苷对HDL2引起的HepG2细胞的作用机制,为寻找和开发调节胆固醇的中药新药打下良好基础。方法体外培养HepG2肝癌细胞,利用MTT实验确定绞股蓝总皂苷的最佳作用浓度,并用不同浓度的绞股蓝总皂苷和300 mg/L HDL2处理HepG2细胞24 h。①通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量检测细胞内胆固醇含量的变化。②利用荧光显微镜和流式细胞仪对HepG2细胞中增加的脂滴进行定性和定量分析。③运用Real-time PCR、Western-blot技术分别检测绞股蓝总皂苷对细胞膜受体SR-B1及胞内胆固醇合成限速酶HMGCR mRNA和蛋白表达的影响。④利用双向电泳结合质谱鉴定技术寻找绞股蓝总皂苷作用前后差异表达的蛋白质。结果①与正常组比较,MTT实验结果显示0-120 mg/L绞股蓝总皂苷对HepG2细胞源性荷脂细胞增殖无影响,油红O染色结果显示细胞内脂滴明显增多,且细胞内胆固醇含量亦显著增加。②经过荧光显微镜观察与流式细胞仪检测,证实了 HepG2细胞中增加的脂滴来自HDL2。③绞股蓝总皂苷作用后,SR-B1、HMGCRmRNA和蛋白的表达水平均显著下降。④经质谱鉴定得到40个差异表达蛋白质,结果显示:在模型组中表达升高、GPS组中表达降低的蛋白点有热休克蛋白60、硫氧还蛋白相关蛋白、calumenin、EF-hand结构域、钙网蛋白、nucleobindin、丝氨酸/精氨酸丰富的剪接因子、半乳糖凝集素1、M2型丙酮酸激酶、valosin-containing protein、3-羟基异丁酸脱氢酶前体、内质网蛋白29、异质性胞核核糖核蛋白K、异质性胞核核糖核蛋白C、DEAD盒蛋白Abstrakt、ZNF254蛋白、烯酰辅酶A水合酶、原肌球蛋白结合蛋白3、stomatin样蛋白2、真核翻译起始因子3、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白、蛋白酶体p3、辅酶Q细胞色素C还原酶核心蛋白、半乳糖激酶1、NAD+依赖型异柠檬酸脱氢酶,在模型组中表达降低、GPS组中表达升高的蛋白点有过氧化物酶2、超氧化物歧化酶、血红素结合蛋白1、谷胱甘肽S转移酶P1、钠氢交换调节因子1、视网膜母细胞瘤结合蛋白7、热休克蛋白27、Stathminl/oncoprotein18、WD-40 重复蛋白、26S 蛋白酶体、Ran 结合蛋白 1、PSMA3、蛋白酶体 Y、cargo selection protein TIP47、焦磷酸酶 1。结论①绞股蓝总皂苷能够增加HDL2中胆固醇逆转运至肝脏中进行代谢,减少血浆中胆固醇的过多堆积。当胆固醇摄入过多时,GPS可以反馈性的调节膜受体SR-B1以及胆固醇合成限速酶HMGCR mRNA和蛋白的表达,对肝细胞进行保护作用。②绞股蓝总皂苷能够通过调节细胞中抗炎抗氧化蛋白、钙离子调控蛋白、细胞代谢、能量代谢等相关蛋白的表达,来维持细胞氧化还原自稳状态、胞内钙离子平衡、以及细胞骨架、细胞代谢、能量代谢稳定等,为胆固醇逆运转的进行提供了保障。