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目的:1.阐明干扰素调节因子-1(IRF-1)逆转胃癌化疗耐药的作用及其分子机制。2.明确临床胃癌组织标本中IRF-1和P-糖蛋白的表达情况,探讨IRF-1在胃癌化疗中的临床应用价值。方法:1.培养两株化疗耐药的胃癌细胞,检测耐药细胞株和亲本细胞株IRF-1的表达差异,分析其与胃癌耐药的相关性。2.通过调节IRF-1的表达,分析其对胃癌细胞化疗耐药性的影响以及对P-糖蛋白的调控作用。进一步利用染色质免疫共沉淀和荧光素酶报告基因等方法阐明IRF-1对P-糖蛋白的调控机制。3.利用IFN-γ诱导胃癌细胞IRF-1表达,探究其对P-糖蛋白表达的影响。4.利用已建立的四环素诱导IRF-1表达胃癌细胞系(MKN45/IRF-1),采用6周BALB/c裸鼠建立胃癌动物模型,并分为IRF-1表达组(强力霉素诱导表达)和对照组,然后以上两组再分别注射化疗药(顺铂、5-氟尿嘧啶和阿霉素),分析肿瘤生长和IRF-1的表达情况,进行IRF-1逆转胃癌化疗耐药的动物实验研究。5.收集胃癌组织标本以及相关的临床病理资料,并结合TCGA数据库胃癌基因表达谱数据,分析IRF-1表达和胃癌化疗耐药的临床相关性。结果:1.IRF-1在化疗耐药胃癌组织和化疗耐药胃癌细胞中均呈相对低表达。2.IRF-1调节胃癌细胞的化疗耐药:IRF-1过表达后,不同浓度的化疗药物(顺铂、5-氟尿嘧啶和阿霉素)处理胃癌细胞,细胞增殖受到抑制、凋亡增加;IRF-1敲低后,细胞增殖呈相反变化;并且IRF-1调节胃癌细胞化疗耐药性的作用与细胞内化疗药物浓度改变有关。3.IRF-1调节胃癌细胞中的P-糖蛋白表达:IRF-1过表达后,P-糖蛋白表达受到抑制;IRF-1敲低后,P-糖蛋白表达呈相反变化。进一步挽救实验证实P-糖蛋白在IRF-1表达逆转胃癌化疗耐药中发挥关键作用。4.IFN-γ抑制胃癌细胞中的P-糖蛋白表达:IFN-γ增加IRF-1表达,并且P-糖蛋白以剂量依赖性方式被抑制。IFN-γ处理后,化疗药物对细胞的抑制率显著增加,该结果与细胞膜上P-糖蛋白表达降低和细胞内药物浓度增加有关。5.IRF-1抑制P-糖蛋白启动子活性:染色质免疫共沉淀证实了 P-糖蛋白基因启动子上IRF-1的转录结合位点,荧光素酶检测技术进一步证明了 IRF-1的表达对P-糖蛋白基因启动子活性具有抑制作用。6.IRF-1表达升高在体内逆转胃癌的化疗耐药:腹腔注射化疗药(顺铂、5-氟尿嘧啶和阿霉素)后,IRF-1表达组中异种移植肿瘤的体积和重量在治疗后显著降低。免疫组织化学、Western-blotting和RT-RCR方法检测共同证实IRF-1表达组中P-糖蛋白表达显著低于对照组。7.统计分析临床病理资料和TCGA数据库资料均表明:IRF-1低表达与胃癌患者P-糖蛋白升高及不良预后相关,并且IRF-1是胃癌患者术后独立的预后因素。结论:1.IRF-1可以在体内和体外逆转胃癌的化疗耐药。2.IRF-1通过下调胃癌细胞P-糖蛋白的表达逆转化疗耐药。3.IRF-1介导了 IFN-γ对P-糖蛋白表达的抑制。4.IRF-1抑制P-糖蛋白的基因启动子活性,在转录水平抑制P-糖蛋白的表达。5.IRF-1与P-糖蛋白的表达呈负相关,并可作为胃癌患者独立的预后指标。