N-WASP对急性白血病细胞增殖的作用及机制研究

来源 :遵义医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rj1340
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目的:1.研究N-WASP(Neural Wiskott-Aldrich syndrome protein)在急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓系白血病(AML)患者中的表达,表达水平与临床特征及预后的相关性,为寻找预测ALL和AML患者预后的新指标提供理论依据;2.研究N-WASP对急性髓系白血病细胞株(THP-1)、急性淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat)增殖、凋亡的影响,为寻找治疗ALL和AML的新靶点提供理论依据。方法:1.收集2019年1月~2021年1月于我院确诊的ALL和AML患者的临床资料(包括年龄、性别、血常规结果、骨髓原始细胞计数、外周血原始细胞计数、FAB分型、危险度分层、预后等);根据疾病状态,将患者分为初发组、缓解组和复发组;根据免疫分型或FAB分型,ALL患者分为B-ALL组和T-ALL组,AML患者分为M0-M7型;根据危险程度,将患者分为高危组、中危组和标危组;根据N-WASP m RNA表达量中位数,将患者分为高表达组和低表达组;同时以同期、同年龄段的非血液系统恶性疾病患者作为对照,各采集骨髓2m L;2.利用RT-q PCR和Western Blotting方法检测患者N-WASP m RNA及N-W ASP蛋白表达情况,分析N-WASP m RNA表达与患者临床特征及预后的相关性;3.利用慢病毒感染在THP-1和Jurkat细胞中过表达N-WASP,构建稳定过表达N-WASP的白血病细胞株后,CCK8法检测细胞增殖情况,Western Blotting方法检测凋亡蛋白BCL-2和Caspase-3的表达,同时检测JAK2/STAT3信号通路中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达,以及PI3K/AKT信号通路中AKT蛋白和MAPK/ERK信号通路中ERK蛋白的表达。RT-q PCR检测STAT3m RNA的表达情况。结果:1.本研究共纳入急性白血病(AL)患者125例,其中ALL 66例,AML 59例。对照组20例。66例ALL患者中,男性28例,女性38例,中位年龄12岁(1.5-70岁);初发组42例,缓解组14例,复发组10例;急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)58例,急性T淋巴细胞白血(T-ALL)患者8例;标危(SR)34例,中危(IR)20例,高危(HR)12例;59例AML患者中,男性30例,女性29例,中位年龄13.5岁(1.2-69岁);初发组38例,缓解组17例,复发组4例;M2 16例、M3 17例、M4 11例、M5 13例、M7 2例;SR 10例,IR 16例,HR 33例。对照组中,男性10例,女性10例,中位年龄14岁(0.8-72岁)。2.ALL患者及AML患者N-WASP m RNA和N-WASP蛋白的表达均明显低于对照组(P<0.05)。3.N-WASP m RNA表达水平与ALL、AML患者的性别、年龄、血型、血常规结果、外周血及骨髓幼稚细胞数、肝脾肿大、凝血功能障碍、肝肾功能损害、融合基因和染色体异常等临床指标均无明显相关性(P>0.05)。4.ALL患者中,疾病状态:初发及复发患者N-WASP m RNA表达明显低于缓解组和对照组(P<0.05),缓解期患者与对照组相比无显著差异(P>0.05);免疫分型:B-ALL、T-ALL患者N-WASP m RNA表达比对照组明显下降(P<0.05),B-ALL患者N-WASP m RNA表达比T-ALL患者更低;危险程度:高危组和中危组患者N-WASP m RNA表达明显低于标危组及对照组(P<0.05),标危组与对照组相比无显著差异(P>0.05);N-WASP m RNA表达量越低,总体生存率(OS)越低。5.AML患者中,疾病状态:初发患者N-WASP m RNA表达低于对照组(P<0.05),而复发及缓解期患者与对照组相比无显著差异(P>0.05);FAB分型:M2、M3、M4、M5、M7患者N-WASP m RNA水平与对照组相比无显著差异(P>0.05),以上各型患者之间的表达也无显著差异(P>0.05);危险程度:高危、中危及标危患者N-WASP m RNA表达均低于对照组(P<0.05),且高危和中危患者N-WASP m RNA表达量比标危患者更低(P<0.05);N-WASP m RNA表达量越低,总体生存率(OS)越低。6.过表达N-WASP的THP-1和Jurkat细胞株的增殖明显低于对照组(P<0.05)。7.过表达N-WASP的THP-1和Jurkat细胞株中,凋亡相关蛋白Caspase-3和BCL-2的表达与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。8.过表达N-WASP的THP-1细胞株中,与对照组相比,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、AKT蛋白的表达下降(P<0.05),ERK蛋白的表达升高(P<0.05),STAT3 m RNA的表达下降(P<0.05);过表达N-WASP的Jurkat细胞株中,与对照组相比,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达下降(P<0.05),ERK、AKT蛋白的表达升高(P<0.05),STAT3 m RNA的表达下降(P<0.05)。结论:1.ALL和AML患者中均存在N-WASP基因低表达,其低表达与患者疾病状态、危险程度及不良预后相关,可能是判断ALL和AML患者病情轻重和预后的新指标;2.N-WASP可抑制急性白血病细胞株THP-1、Jurkat增殖,对凋亡无明显影响;3.N-WASP在转录水平抑制JAK2/STAT3信号通路,也可影响AKT、ERK蛋白的表达。N-WASP可能成为治疗ALL和AML的新靶点。
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