金丝小枣环磷酸腺苷制备技术研究

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环磷酸腺苷是一种环状核苷酸,是传递生命信息的“第二信使”。金丝小枣是我国枣中的珍品,富含多种营养物质及生物活性物质,其中环磷酸腺苷含量较高,颇具开发利用价值。以金丝小枣为原料制备环磷酸腺苷,为枣资源利用开辟了新的领域。本研究立足国内金丝小枣环磷酸腺苷开发利用现状,以制备纯度在30%和95%以上环磷酸腺苷为目标,应用提取、纯化新技术、现代分析检测技术等,研究了金丝小枣环磷酸腺苷提取、分离纯化技术。主要获得的研究结果如下:1.本研究采用超声波辅助提取法,对金丝小枣环磷酸腺苷进行提取。在单因素实验结果的基础上,采用正交实验对提取条件进行优化,确定超声辅助提取金丝小枣环磷酸腺苷的最佳工艺条件为:常温,超声时间12 min、料液比1:12、超声功率240 W,此条件下金丝小枣环磷酸腺苷提取率为76.46%。2.将微波-超声波辅助提取法应用到金丝小枣环磷酸腺苷的提取,通过单因素实验、PB实验、BB实验,确定最佳工艺条件为:微波功率440 W、微波时间64 s、料液比1:8、超声时间21 min、超声功率300 W、超声温度20℃,在此条件下,金丝小枣环磷酸腺苷提取率为90.83%。与超声辅助提取法、水提法相比,微波-超声波辅助提取环磷酸腺苷提取率分别提高了14.37%及28.66%。3.从饱和吸附解析实验和D201树脂对金丝小枣环磷酸腺苷具有良好的静态吸附解析动力学特性两方面考虑,确定利用D201离子交换树脂纯化金丝小枣环磷酸腺苷。通过研究动态吸附解析实验和不同因素对离子交换树脂纯化金丝小枣环磷酸腺苷的影响,确定离子交换树脂法的最佳工艺条件为:样液pH值不变、上样液浓度30 mg/L、上样液速度2 mL/min上样,在甲酸浓度0.5 mol/L、甲酸洗脱流速3 mL/min的条件下洗脱,干燥,得到纯度在34%以上的环磷酸腺苷粗品。4.通过研究不同因素对硅胶柱层析法纯化金丝小枣环磷酸腺苷的影响,确定了硅胶柱层析法纯化金丝小枣环磷酸腺苷的最佳工艺条件为:上样液浓度为0.4 mg/mL、上样液的流速为2 mL/min、样品p H为4.5,用乙酸乙酯:苯:甲醇=1:1:3作为洗脱剂,洗脱流速为3 mL/min的条件下洗脱,干燥,得到纯度在96%以上的环磷酸腺苷制备品。
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