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多药耐药性(multidrug resistance, MDR)是肿瘤化疗失败的主要原因。对于大多数抗肿瘤药物,在经过一段时间的化疗后,肿瘤细胞均会产生多药耐药现象,但其耐药机制,目前尚没有统一的看法,一种较为流行的观点是P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)介导的药物外排作用。所以,国内外有许多研究者试图将P-gp抑制剂(如维拉帕米、PSC833等)与抗肿瘤药物共同包载于纳米递药系统内递药,既可以拮抗肿瘤细胞主动外排药物的作用,又可以降低药物毒副作用。但因第一、二、三代P-gp抑制剂均存在无选择性的缺陷,即在抑制肿瘤细胞的P-gp的同时,正常细胞的P-gp也受到抑制,这会使得患者的正常组织中出现抗癌药物蓄积。叶酸被证明与许多肿瘤细胞表面具有较强的亲和活性；长春新碱在治疗过程中会使患者对阿霉素、紫杉醇、秋水仙素等产生交叉耐药性,相应地,在用阿霉素、紫杉醇治疗时也会使患者对长春新碱发生交叉耐药性。所以,我们拟构建一种不含P-gp抑制剂的、包载有长春新碱的主动靶向递药系统——叶酸-PEG-脂质体/长春新碱(FA-PEG-LS/VCR)递药系统,旨在提高脂质体包载抗癌药物对多药耐药性肿瘤的靶向性和治疗效果,改善肿瘤细胞对长春新碱的多药耐药性。第一章由两部分组成。第一部分,开展了脂质体功能性膜材料叶酸-聚乙二醇3350-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(FA-PEG3350-DSPE)的合成与表征；第二部分,进行了叶酸修饰的脂质体递药系统的构建与表征。我们采用N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)脱水缩合形成酰胺键的方法将叶酸链接到双功能PEG(NH2-PEG-NH2)的一端,另一端用琥珀酸酐(SUC)连接并引入羧基,产物再与DSPE上的氨基发生脱水缩合反应得到终产物FA-PEG3350-DSPE,并采用HPLC、1H-NMR等技术手段对其进行了结构表征。采用成膜水化-挤压过膜法制备了叶酸修饰的分别包载长春新碱(VCR)、5-羧基荧光素(FAM)、近红外染料碘化1,1’-双十八烷基-3,3,3’,3’-四甲基吲哚三羰花青(以下简称“碘化羰花青”,DiR)的PEG化脂质体,并对其粒径及分布、外观形态、包封率、载药量和内容物泄漏率等性质进行了表征。结果显示：成功制备了FA-PEG3350-DSPE,纯度达95%以上；制备的脂质体,包括叶酸-PEG-脂质体／长春新碱(]FA-PEG-LS/VCR)、PEG-脂质体/长春新碱(PEG-LS/VCR)、叶酸-PEG-脂质体/5-羧基荧光素(FA-PEG-LS/FAM)、PEG-旨质体/5-羧基荧光素(PEG-LS/FAM)、叶酸-PEG-脂质体/碘化羰花青(]FA-PEG-LS/DiR)和PEG-脂质体/碘化羰花青(PEG-LS/DiR)等,平均粒径在70-90nm之间、分布均匀,透射电镜和原子力显微镜考察结果表明,长春新碱脂质体外观圆整,为球形或类球形粒子,各种脂质体的内容物泄漏率均在2%以内(4℃静置4-72h),叶酸修饰对脂质体理化性质均无明显影响。浓缩前后脂质体的上述属性也均无明显变化。本章的工作为后续研究奠定了物质基础。第二章由三部分组成。第一部分,考察了叶酸修饰的脂质体对多药耐药性口腔表皮癌细胞KBv200的体内外靶向性；第二部分,评价了FA-PEG-LS/VCR递药系统对该细胞的体内外药效；第三部分,验证并探讨了该细胞的多药耐药机理。在第一部分中,我们采用细胞摄取试验(流式细胞分析法)考察了叶酸修饰脂质体对KBv200细胞的体外靶向性；通过向裸小鼠腋下接种KBv200细胞的方法构建了KBv200荷瘤裸小鼠模型,并在该肿瘤模型上研究了上述递药系统的体内靶向性。在第二部分中,我们采用MTT法评价了FA-PEG-LS/VCR递药系统对KBv200细胞的体外生长抑制作用；采用KBv200肿瘤动物模型对上述递药系统抗多药耐药肿瘤药效进行了评价；采用HE和TUNEL染色法定量考察了FA-PEG-LS/VCR递药系统的促凋亡效果。在第三部分中,我们采用第一代P-gp抑制剂维拉帕米抑制耐药细胞株KBv200及其敏感株KB,比较抑制前后药物对细胞生长抑制情况。结果表明：叶酸修饰的PEG化脂质体与普通PEG脂质体相比,对KBv200细胞有更好的体内外靶向性,前者的体外靶向效果(以细胞对FAM的摄取比例表示)是后者的2.96倍,前者的体内靶向效果(以肿瘤单位质量的DiR荧光强度与时间的乘积表示)是后者的1.68倍。1FA-PEG-LS/VCR递药系统对多药耐药性口腔表皮癌KBv200荷瘤裸小鼠表现出良好的抑瘤效果,其体积和质量抑瘤率分别是60.11%和59.98%,当给药剂量提高2倍后,相应的抑瘤率也提高到74.75%和69.55%,且裸小鼠生存状态良好；肿瘤组织切片结果显示,该递药系统与PEG-LS/VCR、游离VCR、生理盐水相比具有较高的诱导凋亡作用,四者凋亡指数分别为24.1±3.1%、14.4±3.2%、11.8±4.4%、5.6±2.2%。线粒体膜电位变化水平提示,该递药系统能够有效提高肿瘤细胞线粒体膜的去极化程度,间接说明该递药系统具有较好的促凋亡能力。P-gp经维拉帕米抑制后,FA-PEG-LS/VCR. PEG-LS/VCR和游离VCR对KBv200细胞的生长抑制作用均显著增强,IC50值分别由抑制前的26.92nmol/L、398.11nmol/L、1584.89nmol/L变为8.66nmol/L、123.03nmol/L、288.40nmol/L,其中,游离VCR对KBv200细胞的毒性增幅最大；上述三种不同剂型的VCR对KB细胞的生长抑制作用增强效果微弱,IC50值几乎没有变化,表明P-gp在该细胞株多药耐药性的形成中起着重要的作用,也提示叶酸修饰的长春新碱脂质体递药系统具有良好的改善多药耐药性肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用。综上所述,本论文成功构建了一种叶酸修饰的包载长春新碱的靶向脂质体递药系统,静脉给药后对皮下多药耐药性肿瘤具有良好的靶向性和抑制生长作用。该递药系统具有改善多药耐药性肿瘤靶向治疗效果的潜在应用价值。