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草鱼是我国淡水养殖的主要品种之一，约占我国总养殖量的23%。引起草鱼出血病的草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus，GCRV）流行广、危害大、发病季节长，致死率高，是我国淡水养殖中最为突出的问题之一。目前对该病毒还没有有效防治的药物或方法，因而进行抗草鱼呼肠孤病毒的研究具有重要意义。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一种由小干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）介导的基因沉默途径，它广泛存在于各种生物中，具有高度特异性和高效性，可以用来作为抑制病毒表达的工具。本文主要的研究是草鱼肾细胞（Ctenopharyngodon idellus kidney cells，CIK）中GCRV的感染对RNAi信号通路激活方式的影响，主要分以下几个方面：1、验证CIK中是否存在RNAi。将质粒pEGFP-N1和体外人工合成的egfp（荧光蛋白基因）特异的双链RNA（EGFP-dsRNA）共转染到CIK细胞中。48h后，用荧光显微镜观察EGFP蛋白的荧光强度，实时定量PCR（qRT-PCR）检测egfp mRNA的表达量，以及用以DIG标记的egfp RNA探针进行Northern Blot检测是否有egfp特异的小分子RNA生成。结果显示，共转染质粒pEGFP-N1与EGFP-dsRNA的EGFP蛋白的荧光强度很弱，egfp mRNA的表达量也很低，而且产生了egfp特异的小分子RNA，但是共转染S10（GCRV第10条基因组片段）特异的dsRNA（S10-dsRNA）和pEGFP-N1的荧光强度很强，egfp mRNA的表达量也很高，而且没有产生egfp特异的小分子RNA。这些结果说明CIK细胞中存在着RNAi。2、GCRV感染对CIK细胞中RNAi信号通路激活方式的影响，共分三个方面。①研究了GCRV裸链dsRNA基因组与RNAi的相互作用。将GCRV的裸链基因组dsRNA和人工合成的S10-dsRNA，分别转染入CIK细胞，用DIG标记的S10RNA作为探针，进行Northern Blot用来检测S10特异的小分子RNA的生成水平。结果显示，未被GCRV感染的CIK细胞，分别转染GCRV的裸链dsRNA和S10-dsRNA都产生了S10序列特异的小分子RNA，但是GCRV感染组没有特异的小分子RNA的产生，初步推断GCRV裸链基因组对Dicer蛋白敏感，而GCRV的感染能够保护基因组dsRNA不被RNAi降解成病毒特异的小分子RNA；②研究GCRV的感染对siRNA介导的基因沉默的影响。将人工合成的egfp特异的siRNA（EGFP-siRNA）与pEGFP-N1共转染到GCRV感染过的CIK细胞中，转染48h后荧光显微镜下观察EGFP蛋白的荧光强度，以及用qRT-PCR检测细胞总mRNA中egfp mRNA的表达情况。结果显示，GCRV感染的CIK细胞中共转染pEGFP-N1和EGFP-siRNA的实验组有很强的荧光信号与只转染pEGFP-N1的信号强度相似，另外GCRV感染的CIK细胞共转染pEGFP-N1和EGFP-siRNA的实验组egfp mRNA的表达量也与感染细胞只转染pEGFP-N1的对照组相似，它们都高于未感染细胞共转染pEGFP-N1和EGFP-siRNA的对照组。说明感染GCRV的CIK细胞中siRNA介导的基因沉默受到了抑制；③研究了GCRV的复制与Dicer转录水平的相互关系。提取GCRV感染后0h，4h，8h，12h，16h，20h，24h以及28h的CIK细胞总RNA，利用qRT-PCR测定每个时间点Dicer的表达量以及用TCID50测定各时间点的病毒滴度。结果显示，从第20h开始Dicer mRNA大量表达（P﹤0.05），TCID50结果表明从第20h病毒复制量达到一个很高的水平，对二者进行相关性分析，相关系数R2为0.9572，说明DicermRNA的表达量与病毒滴度有较高的相关性，GCRV的复制促进了Dicer mRNA的表达。结论： CIK细胞中存在RNAi；GCRV裸链基因组dsRNA对RNAi是敏感的，而GCRV的感染能抑制细胞中的RNAi，而且Dicer基因的转录水平与GCRV的复制成正相关性。