小麦黄矮病（Wheat yellow dwarf disease）是我国小麦主产区非常严重的小麦病毒病,由大麦黄矮病毒（Barley yellow dwarfvirus,BYDV）引起。我国大麦黄矮病毒主要有四个株系,其中GAV,PAV为主流株系。大麦黄矮病毒在田间通过介体蚜虫进行传播,荻草谷网蚜Sitobionmiscanthi（Takahashi）（在中国曾被误定为麦长管蚜Sitobion avenae（Fabricius）,且目前仍在普遍沿用）是田间麦蚜优势种且可以同时传播上述两种病毒,对小麦造成严重的损失。BYDV在蚜虫体内以循环非增殖的方式进行传播,但蚜虫体内存在中肠和唾液腺屏障,蚜虫体内存在协助病毒粒子突破传播屏障的互作蛋白,但目前互作蛋白种类及其功能尚未明晰。前人利用酵母双杂交技术筛选出禾谷缢管蚜体内与BYDV-GPV互作蛋白CYP4G15,本实验室前期利用酵母双杂技术和Bi FC技术筛选和鉴定出荻草谷网蚜体内与BYDV-GAV互作的蛋白Lwr和Ntf。鉴于此,本研究以荻草谷网蚜体内CYP4G15、Lwr和Ntf基因为研究对象,利用q RT-PCR技术研究目的基因在荻草谷网蚜体内各组织的表达情况,同时通过RNAi的技术对CYP4G15、Lwr和Ntf参与荻草谷网蚜获取、传播和存留BYDV-GAV,BYDV-PAV的功能进行验证。主要研究结果如下:一、扩增得到CYP4G15 cds序列全长,分析蛋白结构发现CYP4G15蛋白包含一个跨膜结构域,其上没有信号肽,亚细胞定位在内质网膜。亲缘关系与桃蚜最近,与双翅目,鳞翅目和鞘翅目等其他目昆虫亲缘较远。二、解剖获得未感染与感染BYDV-GAV荻草谷网蚜的头胸部和腹部,同时获得消化道和血淋巴组织。结果发现,感染GAV蚜虫的头胸部和腹部的CYP4G15、Lwr和Ntf的表达均无显著差异;血淋巴组织的CYP4G15的表达显著高于消化道组织,而血淋巴和消化道组织的Lwr和Ntf的表达均无显著差异。与未感染蚜虫比较,感染BYDV-GAV的荻草谷网蚜消化道的CYP4G15、Lwr和Ntf表达均显著降低,头胸部的Ntf的表达显著上升,其余部位（组织）的CYP4G15、Lwr和Ntf的表达量无显著差异。三、根据基因序列设计体外合成ds RNA的引物,外源合成特异性ds RNA,利用显微注射法将ds RNA递送到荻草谷网蚜体内,利用q RT-PCR检测目的基因的沉默效率,结果表明成功将三个目的基因沉默。三个目的基因均在48 h达到最高的干扰效率,CYP4G15为51.53%,Lwr为55.89%,Ntf为49.61%。注射三种目的基因的ds RNA后发现均未对蚜虫的死亡率和繁殖率等适合度参数产生影响。四、RNAi试验表明,（1）CYP4G15可以协助荻草谷网蚜获取BYDV-PAV,促进传播BYDV-PAV,但会降低存留BYDV-PAV的量;而仅促进荻草谷网蚜获取BYDVGAV,对传播和存留均无显著影响。（2）Lwr可以协助荻草谷网蚜获取BYDV-PAV,对传播和存留BYDV-PAV没有影响;同时,Lwr能抑制蚜虫获取BYDV-GAV,但能促进传播BYDV-GAV,且对存留BYDV-GAV无显著影响。（3）Ntf可以协助荻草谷网蚜获取BYDV-PAV和BYDV-GAV,但对传播和存留BYDV-PAV和BYDV-GAV均没有影响。综上所述,CYP4G15、Lwr和Ntf在感染和未感染BYDV-GAV蚜虫体内部位（组织）表达有差异,而且CYP4G15、Lwr与Ntf在荻草谷网蚜对BYDV-PAV和BYDVGAV获取、传播和存留方面发挥均发挥重要的作用。本研究可为后续深入研究荻草谷网蚜的传毒机制和以此三个基因为基础进行小麦黄矮病的新型防治方法的研究打下基础。