侧孢短芽孢杆菌抗菌肽Brevilacterin的抑菌机理研究

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抗菌肽是一类具有抑菌活性的多肽,具有安全、高效和不易产生耐药性等特点,在医疗、食品及动植物抗病虫害等领域有广阔的应用前景。本实验室前期从土壤中分离到的一株能产抗菌肽的侧孢短芽孢杆菌,其所产的抗菌肽Brevilacterin具有广谱抑菌活性,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌均有抑制作用,但其抑菌机理尚未明确。本文以金黄色葡萄球菌(S.aureus ATCC 25923)和大肠杆菌(E.coli ATCC44752)为指示菌,来探讨Brevilacterin的抑菌机理,为其开发和应用提供理论基础。研究抗菌肽Brevilacterin对S.aureus ATCC 25923作用机理。采用二倍稀释法测定最小抑菌浓度并绘制时间-杀菌曲线,通过探针Di SC3(5)来考察菌体膜电势(Δψ)的变化,PI探针标记后使用流式细胞仪来测定细胞膜通透性的变化,使用透射电镜来观察S.aureus ATCC 25923超微结构的变化,紫外分光光度法考察核酸和蛋白质泄漏情况,凝胶阻滞和紫外光谱法研究抗菌肽Brevilacterin与菌体DNA的作用情况,通过SDS-PAGE考察抗菌肽Brevilacterin对菌体蛋白质的影响。结果表明,抗菌肽Brevilacterin对S.aureus ATCC 25923的MIC为12.9 AU/m L,抗菌肽Brevilacterin能使S.aureus ATCC 25923细胞膜电势降低,改变细胞膜的通透性,改变菌体的形态和结构,使细胞壁变粗糙,细胞膜收缩、质壁分离,但不会破坏菌体形态的的完整性,也不会造成明显的核酸和蛋白质泄漏。抗菌肽Brevilacterin能与S.aureus ATCC 25923的DNA发生结合作用,能使菌体内DNA的数目减少,能使DNA的紫外光谱产生增色效应。抗菌肽Brevilacterin还能影响S.aureus ATCC 25923菌体蛋白质的表达。研究抗菌肽Brevilacterin对E.coli ATCC 44752作用机理。测定最小抑菌浓度并绘制时间-杀菌曲线,考察菌体膜电势(Δψ)的变化,通过探针NPN标记外膜实验考察抗菌肽Brevilacterin作用后E.coli ATCC 44752外膜通透性的变化,采用ONPG乳糖诱导酶指示法测定抗菌肽Brevilacterin对E.coli ATCC 44752内膜通透性的影响,检测细胞膜完整性的变化,观察菌体超微结构的改变,考察DNA和蛋白质泄漏情况,研究抗菌肽Brevilacterin对菌体DNA和蛋白质的影响。结果表明,抗菌肽Brevilacterin对E.coli ATCC 44752的MIC为205 AU/m L,抗菌肽Brevilacterin能使E.coli ATCC44752细胞膜电势降低,提高外膜和内膜通透性,破坏细胞膜的通透性和完整性,改变细胞的形态和结构,使菌体破损,出现空腔,并且使核酸和蛋白质发生明显泄漏。抗菌肽Brevilacterin能够与E.coli ATCC 44752的DNA发生结合作用或影响体内DNA的复制,能使DNA的紫外光谱产生增色效应。抗菌肽Brevilacterin还会使E.coli ATCC 44752菌体蛋白含量减少。
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