【摘 要】
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生长停滞特异性蛋白6（growth arrest specific protein 6,GAS6）在肿瘤的发生发展中起重要的作用,其信号转导参与细胞的增殖、黏附与迁移,但它在子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）中的相关功能及分子机制尚不明确。本研究从GEO数据库检索并下载子宫内膜异位症相关转录组数据集,并对其进行GEO在线分析,筛选差异基因进行GO聚类和KEGG通路富集分析。在子宫
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生长停滞特异性蛋白6（growth arrest specific protein 6,GAS6）在肿瘤的发生发展中起重要的作用,其信号转导参与细胞的增殖、黏附与迁移,但它在子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）中的相关功能及分子机制尚不明确。本研究从GEO数据库检索并下载子宫内膜异位症相关转录组数据集,并对其进行GEO在线分析,筛选差异基因进行GO聚类和KEGG通路富集分析。在子宫内膜异位症临床样本中,利用qRTPCR对3个以上数据集所共有的差异基因进行定量验证。采用免疫组化、qRT-PCR验证潜在靶标GAS6及上皮间充质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）标志物的表达模式,并利用免疫荧光对GAS6和E-cadherin进行共标。最后对HEC-1A细胞进行GAS6过表达,qRT-PCR、Western Blot以及细胞划痕实验检测EMT标志物的表达水平和细胞的迁移能力,明确GAS6上调表达介导EMT过程促进细胞迁移参与子宫内膜异位症的发生与发展。研究结果如下:一、子宫内膜异位症差异基因的筛选与分析以“endometriosis”或“EMs”作为关键词在GEO数据库中共检索出4个子宫内膜异位症相关转录组数据集。通过GEO在线分析和Venn图取交集,共筛选出47个差异基因。通过Metascape对差异基因进行GO和KEGG富集分析,结果显示其主要富集于细胞迁移等生物学过程以及MAPK、PI3K-AKT、紧密连接等相关信号通路中。二、子宫内膜异位症差异基因的定量验证10例无内异症且无明确疾病妇女的在位子宫内膜作为本研究的对照组,11例卵巢巧克力囊肿病人异位子宫内膜作为病例组,利用qRTPCR对3个以上数据集所共有的9个差异基因进行定量验证,结果显示病例对照组的m RNA水平均符合生物信息分析结果。三、GAS6及EMT标志物在子宫内膜异位症临床样本中的表达模式利用qRT-PCR和免疫组化检测GAS6及EMT标志物在子宫内膜异位症临床样本中的表达模式,结果显示GAS6在病例组中的表达水平显著高于对照组（P<0.05）,并且病例组中存在EMT的标志现象即E-cadherin下调表达（P<0.05）、Vimentin上调表达（P<0.01）。在子宫内膜异位症临床样本中利用免疫荧光对GAS6和E-cadherin进行共标,结果显示在GAS6高表达的子宫内膜异位症病人异位子宫内膜腺上皮细胞中,E-cadherin显示低表达,提示GAS6可能在子宫内膜异位症中介导EMT过程。四、HEC-1A细胞过表达GAS6介导EMT促进细胞迁移对HEC-1A细胞进行GAS6过表达,并利用qRT-PCR、Western Blot、细胞划痕检测EMT标记物的表达模式以及细胞的迁移能力。结果显示GAS6上调表达（P<0.01）能够抑制E-cadherin（P<0.05）、促进N-cadherin（P<0.01）和Vimentin（P<0.01）的m RNA水平并且促进细胞的迁移能力（P<0.05）。综上所述,本研究初步揭示GAS6在子宫内膜异位症病人中高表达及其可能介导EMT过程,促进子宫内膜上皮细胞的迁移,参与子宫内膜异位症的发生与发展,为子宫内膜异位症的临床诊断和治疗提供潜在靶标。
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