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由于转基因细胞合成分泌的内源性蛋白表达产物活性高,能有效的同细胞表面受体结合,免疫排斥反应小,副作用小,为了探索转基因细胞在组织化膀胱体内血管化的应用,我们将VEGF165 cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(-),构建真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165;采用电转化方法将含VEGF165的真核表达质粒转染入鼠膀胱平滑肌细胞,用RT-PCR检测VEGF165基因在鼠膀胱平滑肌细胞中的表达,并用MTT法检测转染后细胞上清液中VEGF165的生物学活性。结果显示将构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165转染入鼠膀胱平滑肌细胞后,VEGF的表达增高,转染后细胞上清液具有促使内皮细胞增殖的生物学活性。为进一步了解所转染的膀胱平滑肌细胞在动物体内的促血管生成作用,我们将种植了转染VEGF的膀胱平滑肌细胞体外培养后,移植至大鼠体内,并以膀胱缺损自然愈合和单纯植入SIS为对照进行观察,于术后10周内每隔2周取标本进行组织学和免疫组化检测CD34和VEGFR2的表达,观察支架植入物的组织生长和修复情况,结果显示膀胱缺损自然愈合组的大鼠术后1周时膀胱缺损区已有膀胱移行上皮形成,第2周时新生的膀胱粘膜已覆盖缺损区。在植入SIS的两组动物中,术后1周时炎性细胞浸润明显,可见膀胱移行上皮形成;术后2周时炎性细胞减少,单纯SIS植入组和转染VEGF组均可见完整的上皮形成,两组未见明显的差异;此时已有新生毛细血管,VEGF受体的表达呈阳性,且转染VEGF组中新生毛细血管数量和VEGF受体的阳性表达细胞数高于单纯SIS植入组(P<0.05);术后4周时新生毛细血管形成较第2周时明显增多(P<0.05),但两组间新生毛细血管数和VEGF受体表达阳性细胞数未见显著性差异(P>0.05),同时两组可见少量平滑肌纤维形成;术后6周以后平滑肌形成逐渐增多,到第10周时可见明显的平滑肌束,两组间新生毛细血管数和VEGF受体表达阳性细胞数未见显著性差异(P>0.05)。尽管文献报道制备的小肠粘膜下层中含有少量细胞生长因子,但尚不明确其在动物体内是否仍具有生物活性,为了解小肠粘膜下层在膀胱组织修复中外源性生长因子VEGF和bFGF释放,我们用ELISA法和MTT法体外测量冻干SIS在PBS孵育液中VEGF和bFGF的含量及对上皮细胞的增殖作用;用猪小肠粘膜下层(SIS)行大鼠膀胱部分修复。术后在不同时间观察大鼠膀胱修复情况,并用组织学免疫组化方法观察VEGF和bFGF的表达,单纯大鼠粘膜及部分肌层缺损组作为对照。结果显示冻干SIS在PBS孵育液中VEGF含量约为121.8±2.683ng/L; bFGF含量约为93.8±3.033ng/L,且对上皮细胞有增殖作用;组织学显示移植的SIS上可见新生毛细血管和平滑肌肌束。免疫组化显示实验组和对照组VEGF和bFGF在术后第1周均呈弱阳性表达,第2周以后实验组VEGF和bFGF表达逐渐增强,至第6周达到高峰,第8周VEGF和bFGF的表达逐渐减弱,而对照组在第1~10周VEGF和bFGF的表达均呈弱阳性,未见明显的表达高峰。可见SIS作为载体可将外源性生长因子带入大鼠体内,在SIS逐渐降解的同时释放生长因子,刺激血管生成和宿主细胞的长入和分化,但外源性生长因子的释放在SIS植入8周左右开始下降,因而如何充分利用SIS作为生长因子的载体,并使生长因子能得以持续释放,实现重建膀胱的血管化,解决细胞-基质材料移植物血液供应有待进一步探索。