蓝藻NDH-1组装因子cNAF1的鉴定与功能分析

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NADPH脱氢酶复合体(NDH-1)位于类囊体膜上,参与了许多重要的能量反应,包括围绕光系统I(PSI)的循环电子传递(NDH-CET),细胞呼吸和CO2吸收。近年来,有关NDH-1复合体的亚基组成和类型的研究取得了许多重要进展。最近,人们报道了Slr1097参与NdhI亚基的成熟,从而参与NDH-1复合体的组装。然而,目前人们对蓝藻NDH-1的组装过程尚不了解。筛选并鉴定出参与NDH-1组装的蛋白并研究它们的作用机制必将有助于加深人们对NDH-1复合体组装过程的认识。在此背景下,本论文从集胞藻6803转座子突变体库中筛选并鉴定出了一个NDH-1复合体的组装因子,并对其如何参与NDH-1复合体的组装过程进行了深入研究,主要研究成果如下:  1)cNAF1参与了NDH-1复合体的组装。对转座子突变体库进行高光筛选,我们获得了一个高光生长敏感,且NDH-CET活性受损的突变株——Δcnaf1。进一步的生化检测结果表明,cNAF1的缺失显著地减少了NDH-1复合体在类囊体膜上的积累和组装。因此cNAF1是影响NDH-1复合体组装的蛋白因子。  2)cNAF1稳定了NAI300复合体。通过亚细胞定位,我们发现cNAF1位于细胞质中。因此,cNAF1是NDH-1复合体的一个组装因子。进一步的研究结果发现,在蓝藻的细胞质中存在3个NDH-1亲水臂的组装中间体(NAIs)。按照分子量,我们分别将它们命名为NAI300、NAI130、NAI100。随后的研究结果表明cNAF1特异性地存在于NAI300中,它的缺失导致这一组装中间体的瓦解。因此,cNAF1通过稳定NAI300参与了NDH-1亲水臂的组装过程。  3)cNAF1稳定了Slr1097蛋白。我们的蛋白互作实验发现,cNAF1与Slr1097存在蛋白质相互作用。进一步的研究结果发现,cNAF1的缺失瓦解了Slr1097蛋白,但是Slr1097的缺失并没有影响cNAF1蛋白的稳定性。这些结果表明,在细胞质中,cNAF1稳定了NdhI的成熟因子——Slr1097蛋白。因此,cNAF1也通过Slr1097参与了NDH-1亲水臂的组装过程。  综上所述,cNAF1通过稳定组装中间体NAI300和NdhI的成熟蛋白Slr1097参与了蓝藻NDH-1复合体亲水臂的组装过程。
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