白鲜组织培养技术及其内生真菌分离和作用的研究

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白鲜(Dictamnus dasycarps Turcz.)为芸香科植物,多年生草本,以根皮入药,具有抗菌消炎、广谱抗真菌、抗癌、止血、提高机体免疫力等多种药用功能,是重要的皮肤科用药,同时作为护肤保健品广泛应用。主要分布在东北、华北、西南及长江流域地区。近年来,由于应用的不断扩展,新产品的不断开发,植物本身种子繁殖能力较弱的特点,导致资源日趋紧缺,这对白鲜更广泛的开发和应用将带来重要影响。为了有效地保护和利用白鲜资源,解决白鲜资源缺乏的问题,本文研究了白鲜组织培养技术,分离获得了白鲜内生真菌,并将其应用于白鲜悬浮细胞产生白鲜碱的诱导,取得以下结果:1、以茎为材料成功获得了白鲜愈伤组织,并对白鲜愈伤组织诱导培养基进行了优化,结果MS+2.4-D0.5+KT1.5+6-BA1.5(M42)和MS+2.4-D0.5+KT0.5+6-BA0.5(M52)培养基愈伤组织生长旺盛,生物量大,呈淡黄绿色,较疏松,其中M52培养基开始启动较慢,后来愈伤生长速度加快,并获得理想的愈伤组织。2、愈伤经过继代和培养条件的进一步优化,获得了可用于悬浮细胞培养的愈伤组织。以愈伤继代培养基为基础,通过改进获得了悬浮细胞培养基,培养基组成为MS+2,4-D0.5+KT1.5+BA1.5(M4-16)、MS+2,4-D0.5+KT1.5+BA1.0(M4-17),建立了白鲜悬浮细胞培养体系。3、在白鲜愈伤诱导的同时,从10个材料中分离获得了的50个内生真菌单菌落。分别为M1-1至M1-5、M 2-1至M 2-7、M 3-1至M 3-8、M 4-1至M 4-6、M 6-1至M 6-6、M 7-1、M 7-2、M 8-1至M 8-6、M 9-1至M 9-4、M10-1至M10-6。4、以M 1-3、M 3-5、M 1-2、M 1-4、M 6-5、M 1-5、M 6-1、M 1-6等7种真菌为诱导子诱导白鲜悬浮细胞产生白鲜碱,优化了诱导条件,结果以细胞培养的末期(12 d)加入真菌诱导子,对悬浮细胞产生白鲜碱的影响最大,各诱导子对白鲜碱的产生均有明显的促进作用;所有诱导时期,均以诱导子M1-5诱导效果最为明显,M1-2和M6-1次之,M1-4最差,M6-5、M1-6和M1-3对白鲜悬浮细胞产白鲜碱的促进作用不显著。5、建立了简便的白鲜碱检测方法,在237 m处用紫外分光光度计检测白鲜碱的含量与薄层扫描法的验证检测结果差异在0.1%~0.2%之间,误差在实验允许范围内,因此可以直接应用紫外分光光度计在237 nm处检测白鲜碱的含量。
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