CT259、CT703基因在沙眼衣原体感染细胞中的表达研究

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目的分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)L2血清型在急性感染和持续感染两种状态下,其基因CT259、CT703的mRNA及蛋白表达,为进一步研究两基因的生物学效应奠定实验基础。方法1.用IFN-γ处理Ct感染的HeLa细胞,吉姆萨染色光学显微镜观察、以及电镜观察,确定沙眼衣原体持续感染细胞模型建立。2.采用RT-PCR方法检测基因CT259、CT703 mRNA在不同细胞模型中的表达。3.采用Western-blot的方法检测基因CT259、CT703编码蛋白在不同细胞模型中的表达。结果1.成功建立Ct持续感染细胞模型。2.RT-PCR结果显示:Ct持续感染状态下,在宿主细胞中6h开始检测到CT259的表达,12小时开始检测到CT703的表达,持续感染状态下CT259、CT703的表达量无时间依赖性;Ct急性感染状态下,在宿主细胞中6小时开始检测到CT259的表达,12小时开始检测到CT703的表达,随感染时间的延长CT259、CT703 mRNA表达量逐渐增加,具时间依赖性。将持续感染与急性感染各相同时间点CT259、CT703 mRNA灰度值相比较,发现持续感染状态下CT259、CT703 mRNA表达水平明显低于急性感染状态,差别具有统计学意义(P<0.05)。3.Western-blot结果显示:Ct持续感染状态下,在宿主细胞内24h可检测到CT259和CT703的表达,表达量无时间依赖性;Ct急性感染状态下,24h可检测到CT259和CT703的表达;随感染时间的延长,蛋白质表达量逐渐增加,具时间依赖性;相同时间点持续感染状态下CT259、CT703编码蛋白的量明显低于急性感染状态。结论1.成功建立沙眼衣原体持续感染细胞模型。2.Ct持续感染状态下基因CT259、CT703 mRNA水平显著低于急性感染状态。3.Ct持续感染状态下基因CT259、CT703编码蛋白水平显著低于急性感染状态。
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