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目的:筛选661W细胞光损伤机制与HSYA(羟基红花黄色素A)保护作用有关的差异表达蛋白质,为研究661W细胞光损伤和HSYA对光损伤661W细胞的保护作用机制寻求新的思路。方法:1.本实验应用661W细胞制作光感受器细胞光损伤模型,应用HSYA模拟红花黄色素对光损伤细胞进行干预,光照2天所得细胞制成制成蛋白样品。2.蛋白经胰酶酶解至肽段水平再经TMT标记和高酸碱度反向HPLC分级。3.通过EASY-n LC 1000多分子肽分解为小分子,纳喷电离源会对小分子肽进行电离处理再应用质谱仪得出数据,定量蛋白质组学软件包Maxquant来处理数据。4.最后对所得数据进行Gene Ontology分析、Inter Pro结构域数据库比对、KEGG分析、亚细胞结构分析、蛋白质功能富集、基于蛋白功能富集的聚类分析、蛋白互作网络分析等技术处理。结果:1.蛋白定量方法的平行性和准确良好,差异性小,重复性好,质谱结果稳定。2.经生物信息学分析三组蛋白样品质谱分析共得到特异性肽段为55206.0个,其中以1.2倍差异筛选到加药组/正常组中有242个上调蛋白,246个下调蛋白,在加药组/光照组中有57个上调蛋白,21个下调蛋白。3.以1.2倍差异倍数筛选所得566个蛋白进行GO二级注释分类、亚细胞结构定位、COG/KOG功能分类、GO富集分析、KEGG通路富集结果、蛋白结构域富集结果、聚类分析、蛋白互作用网络等一系列技术分析,所得本实验相关光蛋白表达差异显著的机制和细胞组成有:核小体、谷胱甘肽代谢、泛醌、黄素腺嘌呤二核苷酸、细胞色素P 450对异物代谢、组蛋白、表皮生长因子和金属硫蛋白等的相关蛋白质,并且存在42种未知功能蛋白。4.蛋白筛选结果:依据蛋白筛选原则,谷胱甘肽代谢与药物代谢P450机制相关性最大,Cyp1b1在光照条件下上调最显著,Gsta4在HSYA与光照作用下都显著上调。结论:1.质谱分析可以大体上指出三组细胞蛋白之间的差异相关蛋白质,其中核小体、谷胱甘肽代谢、泛醌、黄素腺嘌呤二核苷酸、细胞色素P 450、组蛋白、表皮生长因子和金属硫蛋白等机制和细胞结构的相关蛋白与光损伤和药物保护作用有密切联系。2.其中细胞色素P 450对异物代谢机制和谷胱甘肽代谢机制相关性最为显著。3.筛选到的差异蛋白中Cyp1b1光照条件下升高最明显,加药后有所减低。Gsta1、Gsta4、Gstm2、Gstm5、Gstp1在光照和加药条件下都有所增加。光损伤与Cyp1b1和HSYA与谷胱甘肽代谢的具体关系需要通过蛋白免疫印迹等方法做进一步的验证。