兴安杜鹃生物碱和单宁的提取及生物活性

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采用超声法,以乙醇为溶剂提取兴安杜鹃叶中的活性成分,依次用氯仿和乙酸乙酯萃取,并对所得萃取相进行薄层色谱、硅胶柱色谱和气相色谱分析研究,同时采用气相-质谱联用GC-MS分析技术鉴定。氯仿相在石油醚-乙酸乙酯(4:1)洗脱梯度下洗脱馏分中共鉴定出9种化合物:主要有甲苯(Toluene),相对含量为24.43%;萘(Naphthalene),相对含量为58.09%;邻苯二甲酸二异丁酸(Diisobutyl phthalate),相对含量为13.87%;合成右旋龙脑(L(-)-Borneol),相对含量2.53%;2,2-二甲基-3-戊醇(2,2-Dimethyl-3-pentanol),相对含量0.71%。乙酸乙酯相在甲醇-丙酮(1:2)洗脱梯度下洗脱馏分共鉴定出4种化合物,主要有萘(Naphthalene),相对含量为0.06%,2,4-二叔丁基苯酚(Phenol,2,4-bis(1,1-dimethylethyl)-),相对含量为1.8%,邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate),相对含量为97.6%。采用减压蒸馏法提取兴安杜鹃叶总生物碱,以盐酸小檗碱为标准品,通过紫外-可见分光光度法测定兴安杜鹃叶总生物碱提取物含量,并对所得生物碱提取物进行抑菌性和抗氧化能力测试。结果得到:兴安杜鹃叶中总生物碱的提取率为1.6%;二倍稀释法证实总生物碱对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,最低抑菌浓度均为83μg.mL-1;抗氧化测试证明总生物碱对羟基自由基,亚硝酸根离子和超氧阴离子均有清除能力,清除自由基的IC50值分别为3.71 mg.L-1,4.58 mg.L-1和3.19 mg.L-1。采用超声法对兴安杜鹃叶单宁进行提取,利用紫外分光光度法和磷钼酸-磷钨酸比色法(F-D法)测定兴安杜鹃叶单宁含量,并计算提取率。分别采用单一变量法和正交试验法优化兴安杜鹃单宁提取工艺。对兴安杜鹃单宁进行抑菌活性和抗氧化能力测试。结果得到:单变量法提取兴安杜鹃单宁的最佳提取条件为:丙酮体积分数50%、料液比1:20、超声温度60℃、超声时间40 min、超声功率90 W。选取丙酮体积分数、超声温度、超声时间、料液比等4个因素,每个因素选择3个水平,采用L9(34)正交试验法优化兴安杜鹃单宁提取工艺得到最佳提取条件为:丙酮体积分数40%、超声温度40℃、超声时间40 min、料液比1:15。抑菌测试结果表明:单宁提取液原液对白腐菌和褐腐菌均有一定程度的抑制作用,最低抑菌浓度分别为8.872×10mg·mL1和1.109×10-3mg-mL-1。抗氧化能力测试表明:兴安杜鹃单宁对羟基自由基、亚硝酸根及超氧阴离子的IC50值分别为4.42 g.L-1、5.05 g·L-1和3.36 g·L-1。
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