研究背景:变应性鼻炎（AR）是一种因接触过敏原后由以Ig E及多种炎性介质介导的,发生于鼻腔黏膜的慢性炎症性疾病。变应性鼻炎已经成为一个全球健康问题,尤其是在工业化国家中发病率呈显著上升趋势。根据大量研究显示,变应性鼻炎是哮喘的重要危险因素,变应性鼻炎合并哮喘的发病率在显著上升,尤其是在儿童变应性鼻炎患儿中,合并哮喘的发病率更显著高于成人。据现有研究显示,变应性鼻炎和哮喘虽然都是过敏性炎症疾病,但这两种疾病的易感SNP位点并不完全一致。尽管有大量研究检测变应性鼻炎和哮喘的遗传易感基因,但对于两者疾病共同的基因易感和相关机制研究甚少,并且,几乎没有学者对环境暴露和基因多态性的关系进行探索,现有的研究只为我们提供了非常有限的对呼吸系统过敏性疾病发病机制的理解。MiRNA是最新发现的一类重要的维持体内免疫稳态的并在进化中高度保守的单链RNA分子,长度约为19-25核苷酸。最近的研究显示miRNA在慢性炎症疾病、过敏性疾病中发挥重要作用,如哮喘、变应性皮炎和变应性鼻炎。Mi RNA可以通过抑制m RNA的转录从而影响基因的表达,并且可以影响相关免疫细胞的成熟、分化和活性。现有研究已发现miRNA序列上含有大量与各类疾病相关的SNP位点,这些研究结果可能会让我们更深入理解miRNA的生物起源和这些SNP位点对人类变异和疾病发生所造成的影响。现已发现部分miRNA的SNP位点可能会导致自身免疫性疾病的发生,其中,mi R-21、mi R-126和mi R-155已有研究证明其可能影响Th1/Th2的免疫平衡,但是这些SNP相关研究极少涉及到基因与环境的作用机制。因此,鉴于miRNA中的多个SNP位点在免疫相关疾病和自身免疫疾病中的重要作用,本课题第一部分致力于研究多个相关miRNA的SNP位点与中国儿童变应性鼻炎、变应性鼻炎伴哮喘的遗传易感性;第二部分研究相关miRNA的SNP位点与中国变应性鼻炎的遗传易感性;第三部分研究前部分所得的阳性SNP位点引起过敏性疾病的发病机制,同时,进一步深入研究在变应原环境暴露中,该SNP位点与变应性疾病的作用机制。第一部分Micro RNA基因多态性与中国儿童变应性鼻炎伴/不伴哮喘遗传易感性研究目的:中国儿童变应性鼻炎患儿伴发哮喘的发病率逐年升高。近期的研究报导,多种miRNA的基因多态性位点在变应性鼻炎和哮喘的发病中起重要作用。本部分旨在讨论5个miRNA（mi R-146a,mi R196a2,mi R-499,mi R-149 and mi R-585）的SNPs位点与儿童变应性鼻炎伴或不伴哮喘的相关性。方法:我们收集了176例儿童变应性鼻炎患儿、124例儿童变应性鼻炎伴哮喘患儿及204例健康对照组儿童的外周血标本进行研究。提取血液样本中的DNA,运用PCR-RFLP及DNA直接测序法对样本中7个基因多态位点mi R-146a（rs2910164,rs57095329 and rs6864584）,mi R-196a2（rs11614913）,mi R-499（rs3746444）,mi R-149（rs2292832）and mi R-585（rs62376935）进行基因分型,并统计是否存在遗传易感性。结果:所有儿童变态反应性鼻炎、变态反应性鼻炎伴哮喘例组及健康对照组样本的miRNA基因SNP分型结果均符合哈迪温伯格平衡（P>0.05）。样本PCR-RFLP实验结果和DNA直接测序结果相吻合。儿童变应性鼻炎病例组和变应性鼻炎伴哮喘组中mi R149的rs2292832位点CC基因型及C等位基因频率显著高于对照组（P<0.05）,具有统计学差异;更重要的是,在变应性鼻炎伴哮喘的患儿组中,CC基因型和C等位基因频率也显著高于变应性鼻炎患儿组（P<0.05）。而其它6个miRNA基因的SNP频率在变应性鼻炎患儿组、变应性鼻炎伴哮喘和健康对照儿童组中均未见统计学差异。结论:儿童变应性鼻炎及变应性鼻炎伴哮喘的遗传易感性与mi R149基因多态性有显著相关性;miRNA中mi R149的rs2292832位点的基因多态性与变应性鼻炎、变应性鼻炎伴哮喘的易感性有关;在变应性鼻炎患儿中,CC基因型的患儿更易感哮喘。第二部分miRNA单核苷酸多态与中国人群变应性鼻炎遗传易感性研究目的:课题本部分旨在探讨7个miRNA相关SNP位点mi R-146a（rs2910164,rs57095329 and rs6864584）,mi R-196a2（rs11614913）,mi R-499（rs3746444）,mi R-149（rs2292832）and mi R-585（rs62376935）与中国人群中变应性鼻炎遗传易感性的相关性。方法:我们收集了610例中国变应性鼻炎患者及720例中国正常对照组人群进行病例-对照研究。本研究运用PCR-RFLP方法对所有病例组合对照组样本进行SNP基因分型,其中20%的样本运用直接测序法进行基因检测以证实PCR-RFLP实验结果的可靠性。结果:相比较于正常对照组,变应性鼻炎病例组中mi R-149的rs2292832 SNP位点CC基因型和C等位基因频率显著增高(P=2.60×10-9,OR 2.66;P=4.11×10^-11,OR 1.70,respectively)。Mi R-149是变应性鼻炎的遗传易感基因。结论:本部分研究结果证实mi R-149的rs2292832位点基因多态性与变应性鼻炎遗传易感性显著相关。第三部分变应性鼻炎易感基因miRNA-149基因多态性功能研究目的:本课题前面两部分研究中发现了一个与呼吸系统过敏性疾病显著相关的易感基因mi R-149 rs2292832,所以我们在这部分深入研究mi R-149基因在在环境因素过敏原暴露前后的相关免疫调控功能。方法:从健康人群中提取PBMC细胞进行培养,运用RT-PCR和ELISA方法,分别检测HDM刺激前后rs2292832三种基因型的PBMC的mi R-149表达和上清液中IL-4,IL-5,IL-6,IL-17,IL-10和INF-γ细胞因子的水平。结果:本部分研究发现rs2292832可调控mi R-149表达水平,CC基因型的mi R-149表达水平明显降低（P<0.05）;在HDM刺激后,mi R-149的表达水平相对于刺激前显著下降,IL-4的表达水平明显增高,而INF-γ则有显著的降低。结论:mi R-149基因rs2292832的突变会影响mi R-149的表达,在过敏原暴露后,mi R-149可调控Th1、Th2的免疫功能表达,导致Th1/Th2细胞失衡,从而引起了过敏性疾病的发生。