Survivin与大肠癌细胞凋亡、增殖的关系

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目的:研究Survivin在直肠癌中的表达及Survivin反义寡核苷酸治疗结直肠癌的可能性,并探讨Survivin在胃泌素促结肠癌细胞增殖过程中的作用。方法:采用免疫组化法检测50例直肠癌组织Survivin的表达、微血管密度及结肠癌细胞株SW-480 Survivin的表达,并用原位细胞凋亡检测技术(TUNEL法)检测直肠癌组织中细胞凋亡情况;在脂质体介导下将不同浓度的Survivin 反义寡核苷酸(ASODN)和正义寡核苷酸(SODN)转染入结肠癌细胞株SW-480,用四唑盐比色法(MTT)检测细胞生长活性及其生长抑制率,用流式细胞仪检测Annexin-V-FITC标记的凋亡细胞;胃泌素作用前后Survivin mRNA的表达情况用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行检测。结果: 免疫组化检测结果显示:在正常直肠组织中未检测到Survivin的表达,而直肠癌组织中Survivin阳性表达率56%(28/50,P <0.01),并且其表达与AI及MVD密切有关。生存分析发现:Survivin阴性表达组的累积生存率(81.34%)显著优于阳性表达组(50%,P <0.05);COX模型多因素分析表明:Survivin及<WP=8>AI指数可作为临床预后判断的指标。结肠癌细胞株(SW-480)Survivin呈阳性表达,用0.33μg/μl、0.99μg/μl和1.98μg/μl的Survivin ASODN转染后,癌细胞凋亡率分别为(8.74±0.64)%、(23.53±2.33)%和(36.87±0.61)%;生长抑制率分别为(11.34±3.01)%、(37.72±3.71)%和(50.14±3.33)%,组内两两比较P <0.01,表明ASODN能抑制癌细胞增生活性、促进癌细胞凋亡,并呈剂量依赖性。胃泌素处理结肠癌细胞株(SW-480)后Survivin mRNA的表达明显高于未处理组(P <0.05),细胞增生明显,与对照组和PG+ASODN组比较,差异具有显著性意义(P <0.05),显示Survivin ASODN可抑制胃泌素对癌细胞的促增殖作用。结论:本研究结果提示:凋亡抑制基因Survivin的异常表达与直肠癌细胞凋亡抑制、血管形成及不良预后密切有关。胃泌素可能通过上调Survivin的表达,而发挥促进癌细胞增殖、抗凋亡的作用。Survivin ASODN可抑制结肠癌细胞(SW-480)Survivin蛋白的表达,诱导癌细胞凋亡并抑制其增殖,以Survivin为靶点的反义基因治疗可能具有重要的临床应用价值,值得进一步深入研究。
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