【摘 要】
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目的:研究紧密连接蛋白CLDN6对结肠癌细胞SW1116恶性表型的抑制作用。方法:RT-PCR和Western blot法检测人正常结肠上皮细胞NCM460和人结肠癌细胞SW1116中CLDN6的表达;采用脂质体
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目的:研究紧密连接蛋白CLDN6对结肠癌细胞SW1116恶性表型的抑制作用。方法:RT-PCR和Western blot法检测人正常结肠上皮细胞NCM460和人结肠癌细胞SW1116中CLDN6的表达;采用脂质体法转染pIRES2-EGFP-CLDN6真核表达载体至结肠癌细胞SW1116,经过G418筛选获得表达CLDN6的稳定克隆;采用RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光法鉴定转染效率及稳定克隆中CLDN6的表达和定位;CCK8实验法绘制细胞生长曲线;二维克隆形成实验检测细胞增殖能力;DAPI法和DNA Ladder实验检测细胞凋亡情况;细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;裸鼠成瘤实验和免疫组织化学法检测细胞在裸鼠体内成瘤能力和裸鼠肿瘤组织中CLDN6的表达和定位。结果:获得3个过表达CLDN6的稳定克隆;RT-PCR和Western blot法结果显示,克隆组CLDN6表达明显高于空载组;免疫荧光实验结果显示,CLDN6主要表达于细胞膜和细胞质;CCK8实验结果显示,克隆组细胞生长能力明显低于空载组;二维克隆形成实验结果显示,克隆组细胞增殖能力明显低于空载组;划痕实验和Transwell小室实验结果显示,克隆组细胞迁移和侵袭能力明显被抑制;DAPI法实验结果显示,克隆组凋亡细胞显著多于空载组,DNALadder实验结果显示克隆组细胞凋亡多于空载组;裸鼠成瘤实验结果显示,克隆组肿瘤形成率、成瘤体积和肿瘤重量均低于空载组;免疫组化结果显示,裸鼠肿瘤组织CLDN6主要表达于细胞膜和细胞质,空载组CLDN6几乎无表达。结论:紧密连接蛋白CLDN6明显抑制结肠癌细胞SW1116的细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导SW1116细胞凋亡及降低SW1116细胞在裸鼠体内成瘤能力。
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