油菜是我国最重要的油料作物之一,是食用油的重要来源,提高油菜种子含油量是当前油料作物遗传育种的主要挑战。本文利用基因工程的方法获得油菜长链酰基辅酶A合成酶基因(BnLACS2)转基因植株,并且鉴定了其在种子油脂合成途径中的功能,从而为油菜高油品系的育种提供材料和理论依据。　　 长链酰基辅酶A合成酶(LACS)催化游离的脂肪酸成为长链酰基辅酶A的形式,参与油脂的代谢途径。包括甘油三脂、磷脂的合成、脂肪酸的β-氧化等。我们实验室获得的油菜长链酰基辅酶A合成酶基因BnLACS2,在蛋白酶缺陷型酵母pep4中异源表达,能够提高酵母油脂含量,初步证明其参与油脂合成途径。进化树分析显示,BnLACS2与拟南芥中的LACS2具有很高的同源性,暗示他们可能具有类似功能。利用荧光定量PCR分析BnLACS2在油菜不同组织内的表达模式,结果显示其在各个组织内都有表达,但在种子中的表达量最高,而种子是油脂合成旺盛部位。BnLACS2在烟草叶片内瞬时表达,激光共聚焦分析表明其定位于内质网,而内质网是植物油脂的合成部位。　　 为了研究BnLACS2的功能,我们构建BnLACS2的过量表达以及RNAi抑制表达的转基因植株。转基因植株T1代表型分析显示,BnLACS2的过量表达转基因植株种子含油量提高,而BnLACS2的RNAi抑制表达转基因植株种子含油量降低,证明BnLACS2参与油菜种子的油脂合成途径。　　 我们进一步对BnLACS2调控油脂合成的分子机制进行了进一步的分析。利用二维电泳技术分析了转化pYES2-BnLACS2的酵母与转化pYES2酵母蛋白质组上的差异,质谱分析显示,在酵母中诱导BnLACS2大量表达会引起酵母内糖酵解途径内相关基因的表达上调。根据酵母二维电泳提供的线索,我们利用荧光定量PCR分析了BnLACS2转基因油菜中糖酵解途径、脂肪酸合成途径以及油脂合成途径相关基因的表达情况,结果表明,BnLACS2过量表达的转基因植株,这些基因表达上调,而BnLACS2抑制表达的转基因植株中这些基因表达下调。这些结果初步的说明了BnLACS2在油脂合成途径中的调控作用。