【摘 要】
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目的:通过使用过表达与沉默后的环状RNA小脑变性相关蛋白1的反义转录物(circ RNA CDR1as)对Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行干预,分析成骨分化和血管化相关因子的表达变化,探讨其在体外实验中成骨及成血管影响机制。方法:Balb/C小鼠体外获取BMSCs,验证BMSCs表型抗原及多向分化能力,预实验确定慢病毒(LV)转染BMSCs最佳滴度,分别将适宜滴度的过表达与低表达
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区科技支疆项目(2020E02133);
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目的:通过使用过表达与沉默后的环状RNA小脑变性相关蛋白1的反义转录物(circ RNA CDR1as)对Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行干预,分析成骨分化和血管化相关因子的表达变化,探讨其在体外实验中成骨及成血管影响机制。方法:Balb/C小鼠体外获取BMSCs,验证BMSCs表型抗原及多向分化能力,预实验确定慢病毒(LV)转染BMSCs最佳滴度,分别将适宜滴度的过表达与低表达的circ RNA CDR1as慢病毒(LV)转染至小鼠骨髓间充质干细胞并筛选稳定的细胞株。实验分组:将细胞分为circ RNA CDR1as过表达组、过表达对照组、circ RNA CDR1as低表达组和低表达对照组。通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测慢病毒转染效率;CCK-8法检验慢病毒感染BMSCs后的细胞增殖活性。4组细胞成骨诱导14d、21d,分别进行茜素红和碱性磷酸酶染色;RT-PCR检测目的基因circ RNA CDR1as、成骨分化及成血管特异标志物ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF、Ang-1的m RNA表达水平。结果:(1)流式细胞术鉴定小鼠BMSCs表面标原CD29阳性表达(93.1%),CD31阳性表达(2.4%);(2)流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测显示,慢病毒转染后绿色荧光蛋白(EGFP)表达无明显差异;(3)CCK-8结果显示,过表达对照组细胞增殖活性小于circ RNA CDR1as过表达组,而circ RNA CDR1as低表达实验组细胞增殖活性小于其对照组;(4)茜素红碱性和磷酸酶染色显示,过表达实验组钙盐沉积区域大于过表达对照组与低表达实验组,随着成骨诱导天数的增加,各组钙盐沉积区域也增大。(5)RT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中circ RNA CDR1as、ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的m RNA表达水平显著升高(P<0.001);低表达实验组BMSCs中circ RNA CDR1as、ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的m RNA表达水平显著降低(P<0.001);结论:circ RNA CDR1as基因可调控BMSCs的成骨分化及血管化的能力。
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