丹参制剂及桑白皮的抗氧化药效评价

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自由基医学理论认为疾病的发生是自由基过剩引起的,它为人们对发病的机理和疾病的认识开辟了一条新的道路,这对于目前难以攻克疾病的治疗新方法的探讨具有重要指导意义。因此研究具有高度抗氧化活性的抗氧化剂和开发针对自由基失衡问题的抗氧化新药物具有重大意义。过去对于药物好坏评价的传统方法是看药物中含有某一种或某一类有效成分的多少。但是对于像抗氧化类中药和中药制剂而言,药物抗氧化效果与其中有效成分含量不一定是正相关,且各成分间相互作用复杂,导致该方法不能准确反映药物的实际治疗效果。本文在自由基医学的理论基础上,结合药物药效评价理论,针对治疗氧化损伤类疾病的药物,提出基于抗氧化效果的药效评价的新观点。论文分两个部分,第一部分是方法学研究,建立3种基于自由基清除能力的抗氧化评价体系并对各种实验参数进行优化。第二部分是方法的应用研究,将方法应用于药物体系的评价,站在抗氧化角度,对8种丹参类上市药物和2种中药提取物进行评价。3种抗氧化评价方法分别为:紫外检测DPPH法;采用流动注射化学发光检测H2O2-Fe2+-Luminol的·OH法、邻苯三酚-Luminol-碳酸盐的·O2-法。通过单因素变量法优化了实验参数并对优化后方法的稳定性和精密度进行了考察,证明三种方法稳定性好精密度高方法准确可靠,可应用于对药物体系的抗氧化评价。药物的抗氧化活性可以通过它们对3种自由基的清除能力间接预测,利用自由基清除率与浓度的剂量依赖关系可以求出IC50值。以IC50值为评价指标可以科学地表示药物自由基清除能力,从而反应其抗氧化活性。选择能力治疗心脑血管疾病的8种丹参药物为研究对象,对其抗氧化治疗功效进行了评价。结果显示3种方法评价结果差异大,可比性不大,测定结果仅能代表各自体系自由基清除能力,单一方法很难准确评价药物抗氧化能力。结果证明多方法多角度综合评价的必要性,也说明急需建立标准化评价机制的紧迫性。以桑白皮为研究对象,采用水提醇沉法提取多糖,并采用正交试验考察了桑白皮多糖的提取工艺,获得了最佳提取条件为:加水倍数20倍、超声时间30min、提取温度50℃、提取次数2次。并对最优方案进行验证,提取样品200g得到多糖12.59g,提取率6.30%,结果令人满意。用硫酸苯酚法测定总糖含量,DNS比色法测定还原糖含量,两者之差表示多糖含量。以Vc作为参照评价多糖抗氧化活性,3种自由基清除实验表明桑白皮多糖对DPPH和·OH清除作用与质量浓度剂量相关,结果显示桑白皮多糖对DPPH自由基和·OH具有一定的抗氧化活性,但不及Vc。并发现桑白皮多糖对邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子促luminol发光体系具有增敏作用。进一步研究发现该增敏作用与多糖质量浓度成线性相关。该发现有望发展为多糖的含量测定提供新方法等,具有广泛应用前景和潜在利用价值。采用95%乙醇浸提桑白皮黄酮,AB-8大孔吸附树脂富集纯化黄酮粗提物,紫外分光光度法测定其含量,并考察其抗氧化活性。结果显示大孔吸附树脂处理后的桑白皮黄酮含量可达51%以上。同样以Vc作为阳性对照测定了桑白皮黄酮对三种自由基的清除能力,结果显示清除率与浓度剂量相关,通过与Vc的IC50值比较得知桑白皮黄酮具有很好的抗氧化作用,尤其对·OH和·O2-的清除能力大于Vc。桑白皮黄酮作为天然抗氧化剂,在抗氧化、抗衰老、保健方面具有开发价值和潜力。
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