灵杆菌多糖对小鼠免疫功能调节作用的实验研究

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细菌脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)即细菌内毒素(endotoxin)是一种含有脂类的多糖,具有广泛生物学活性,主要表现出免疫增强作用。但是LPS同时表现出强烈的毒性反应(Shwartzman反应,热原性等),因此阻碍了它在临床上的应用,所以许多研究者一直致力于LPS的减毒研究。灵杆菌多糖(Hemarisin, Bacterium Prodigiosum lipopolysaccharides, BP-LPS)即是基于此目的制取的一种免疫活性物质。BP-LPS也是一种细菌脂多糖,它不仅具有普通LPS的广泛生物学活性,如免疫促进作用、抗肿瘤作用等,而且由于它是从非致病性革兰氏阴性菌“产色型灵杆菌BP-S003号”中提取,因此具有毒性低的优点。本研究初步探讨BP-LPS对小鼠免疫功能的调节作用,为BP-LPS的临床使用提供可靠的科学实验依据。目的:研究灵杆菌多糖对正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。方法:1.用兔红细胞作为免疫原建立小鼠体液免疫反应模型。2.皮下注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型。3.皮下接种S180肿瘤细胞建立荷瘤小鼠模型。4.微量溶血酶标仪分光光度法测定正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠的血清溶血素水平。5.采用二硝基氟苯(dinitro-fluorobenzene, DNFB)诱导迟发型变态反应(delayed-type hypersensitivity, DTH)模型,测定正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠的细胞免疫功能。6.采用碳粒廓清法测定正常小鼠、免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能。7.运用显微镜计数法测定正常小鼠和免疫抑制小鼠外周血白细胞总数。8.MTT法检测小鼠脾细胞的代谢活力,ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-a)和干扰素丫(IFN-γ)的含量。结果:1.抗兔红细胞溶血素峰时间为免疫后d6(免疫当天为d0);最适兔红细胞抗原量为20%。2.每鼠腹腔注射0.2ml 2%兔红细胞,氢化可的松(25mg/kg)、环磷酰胺(20mg/kg)可以抑制小鼠抗兔红细胞溶血素的生成;甘露聚糖肽(4mg/kg)对正常小鼠抗兔红细胞溶血素水平影响不大,但对环磷酰胺免疫抑制小鼠的血清溶血素水平具有明显提高作用。3. BP-LPS对正常小鼠血清溶血素水平、迟发型超敏反应、单核吞噬细胞吞噬功能以及外周血白细胞数有轻微促进作用,但是与对照组比较无统计学意义。4. BP-LPS给药剂量为40 U/kg和20 U/kg可以提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平、迟发型超敏反应、单核吞噬细胞吞噬功能以及外周血白细胞数,与对照组比较有统计学意义。5. BP-LPS给药剂量为40 U/kg和20 U/kg可以提高荷瘤小鼠血清溶血素水平、迟发型超敏反应和单核吞噬细胞吞噬功能,并表现出良好的抑瘤作用,可以提高脾脏脏器指数,与对照组比较有统计学意义。6. BP-LPS终浓度为20 U/ml和10 U/ml时可以提高荷瘤小鼠脾细胞的代谢活力,并能促进脾细胞分泌TNF-α和IFN-γ,与对照组比较有统计学意义。结论:1.以兔红细胞作为抗原成功建立小鼠体液免疫反应动物模型,可用于药物对体液免疫功能影响的研究。2.微量溶血酶标仪分光光度法测定小鼠血清溶血素具有样品需要量少、系统误差小和操作简单等优点,因此优于常规溶血素测定法。3. BP-LPS对正常小鼠的免疫功能影响不大。4. BP-LPS可以提高由环磷酰胺诱导的免疫功能抑制小鼠的特异性和非特异性免疫功能5. BP-LPS可以提高荷瘤小鼠的免疫功能,促进免疫细胞分泌TNF-α和IFN-γ,并具有抗肿瘤作用。
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