扇贝裙边ACE抑制肽的分离纯化及活性研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:liongliong439
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本文为了提高扇贝裙边的高值化利用,通过蛋白酶酶解扇贝裙边工艺的优化,再对酶解物分离纯化获得ACE抑制肽的结构,并通过高血压动物模型试验,验证酶解物的降血压效果。主要研究内容和结果如下:1.以扇贝裙边为原料,探究了胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶酶解产物的ACE抑制活性,其中木瓜蛋白酶的酶解产物ACE抑制率最高,为71.25%;根据单因素和正交试验结果,确定木瓜蛋白酶酶解扇贝裙边最佳酶解工艺条件为料液比(g/mL)1:3,加酶量2.0%,酶解温度60℃,酶解时间1 h,pH 7.0。2.扇贝裙边酶解物冷冻干燥后,经Sephadex LH-20层析柱分离得到七个组分峰,其中F5、F6、F7具有ACE抑制活性,进而通过RP-HPLC(20%乙腈)洗脱后,得到F5-3、F7-2、F7-4具有ACE抑制活性;再次通过RP-HPLC(10%乙腈)进一步纯化后,确定F5-3-3、F7-4-3具有ACE抑制活性,而F7-2洗脱出的八个信号组分均具有ACE抑制活性;最后对F5-3-3进行质谱鉴定,获得ACE抑制肽的序列为Val-Trp(VW),分子量303.17 Da,通过合成后测定其IC50为86.9μmol/L。3.对扇贝裙边来源的ACE抑制肽进行降血压活性测定。通过超滤膜将扇贝裙边酶解液截留成不同分子量范围的样品,其中分子量范围为3 KDa1 KDa酶解产物的ACE抑制活性更高,其IC50值为0.88 mg/mL,将该部分活性肽以灌胃方式给药SHR大鼠,通过尾套法测定SBP,结果显示,活性肽可显著降低SHR的SBP,在给药9天(172±7 mmHg)后,同空白对照组的SBP相比一直表现出极显著性差异(P<0.01),在第28天时其SBP降低到161±3 mmHg,但SHR的SBP高于阳性对照组;在停药后第7天酶解物组SHR的血压为169±5 mmHg,同空白对照组的SBP相比仍都表现出了极显著性差异(P<0.01);同时扇贝裙边活性肽对SHR大鼠的体重增长也有一定的促进作用。第28天停药后,对SHR血清中ACE,AngⅡ,ATG,ALD进行测定,发现ACE,AngⅡ,ATG活性及ALD的含量低于空白对照组;而相对于阳性对照组,酶解物组SHR血清中ACE,AngⅡ,ATG的表达水平略高,但ALD的表达水平相对降低。
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