调肝理脾方对酒精性肝纤维化干预作用的实验和临床研究

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酒精性肝纤维化(alcoholic liver fibrosis ALF)是由于长期大量饮酒引起的肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应,以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝内过量沉积为病理特征。酒精性肝病是西方国家导致肝硬化的主要原因,在我国为肝硬化的第二位原因。目前研究显示,酒精性肝纤维化发病机制的中心环节是肝星状细胞的活化。激活后的肝星状细胞发生了表型和功能的改变,转变为肌成纤维细胞样细胞,通过自分泌和旁分泌机制合成大量细胞外基质(ECM),进而维持或加重酒精性肝纤维化的病情。目前临床上西医对酒精性肝纤维化还没有理想药物,中医依靠整体治疗理论与辨证论治原则在这方面有确定的临床疗效与优势。目的:通过临床试验和动物实验研究调肝理脾方对酒精性肝纤维化的干预治疗作用,并探索其作用机制。本课题由文献研究、临床试验和实验研究三部分组成。文献研究主要系统地论述了中医药对ALD病名、病因病机及治疗方药的研究成果。总结了现代医学对ALF发病机制的研究成果。临床研究方法在以往研究的基础上,采用随机平行对照研究,以调肝理脾方为治疗药,以常用抗肝纤维化中成药复方鳖甲软肝片为对照药,将86例酒精性肝纤维化患者,随机分为治疗组43例和对照组43例。治疗4周后,观察治疗前后临床症状、体征、生化检查、肝纤维化血清指标、B超检查结果的变化情况,根据疗效判定标准进行比较,进一步深化对调肝理脾方的临床研究。结果两组治疗后与治疗前比较,中医证候积分明显下降,均有显著性差异(P<0.05);治疗组和对照组总有效率分别为90.7%和74.4%,两组比较有显著性差异(P<0.05),治疗组优于对照组。在改善腹泻、乏力等症状轻重程度上有显著性差异(P<0.05),治疗组优于对照组。治疗后,两组均能改善肝功能指标ALT、AST和肝纤维化指标HA、PIIINP,具有显著的统计学意义(P<0.05),但两组间无显著性差异(P>0.05)。两组也都能改善肝功能指标GGT和肝纤维化指标CGIV、LN,治疗前后比较均有显著性差异(P<0.05),两组之间比较也具有显著性差异,治疗组优于对照组(P<0.05)。结论1本次临床观察进一步证实,调肝理脾方对改善酒精性肝纤维化的症状、肝功能、肝纤维化指标等方面有良好疗效,且未见明显不良反应,是一种安全有效的复方制剂。2总体说来,调肝理脾方和复方鳖甲软肝片治疗酒精性肝纤维化肝郁脾虚、血瘀痰阻证均有良好的作用;综合比较,调肝理脾方的作用优于复方鳖甲软肝片。实验研究方法主要进行了整体实验,首先以雄性昆明种小鼠筛选出调肝理脾方2号工艺,然后采取50%酒精(北京红星二锅头)灌胃的方法制备酒精性肝纤维化大鼠模型,同时对造模大鼠进行干预,通过检测大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CIV)水平变化和肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)指标,并以RT-PCR检测细胞色素P4502E1(CYP2E1)的表达和免疫组化检测肝组织中α-SMA表达以及肝脏组织HE染色和Masson染色,研究调肝理脾方抗酒精性肝纤维化的作用及其机制。结果1调肝理脾方抗酒精性肝纤维化的作用机制主要为:促进机体产生大量抗氧化因子,降低肝脏中P4502E1的表达,提高机体对自由基的清除能力,保护肝细胞,修复损伤肝细胞,降低转氨酶;显著降低动物血清中LN及HA水平,能有效阻止肝纤维化的进程;同时通过下调α-SMA表达而阻断肝纤维化的进展;2调肝理脾方和复方鳖甲软肝片均能改善肝功能,抗肝纤维化,总体疗效看,调肝理脾方优于复方鳖甲软肝片。结论1调肝理脾方有效预防和逆转了酒精性肝纤维化的发生发展,在抗酒精性肝纤维化方面显示出良好的治疗效果;2调肝理脾方通过抗氧自由基损伤及阻断多个酒精性肝纤维化的病理环节,下调肝脏中P4502E1和α-SMA表达,是其抗酒精性肝纤维化的作用机制。
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