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[目 的]体外用脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞的条件培养基复制TNC-1星形胶质细胞激活模型,研究血管紧张素系统相关蛋白(ACE和AT1)以及NADPH氧化酶2(NOX2)、营养因子(BDNF、IGF-1)和沉默信息调节蛋白3(SirT3)在活化的星形胶质细胞中的表达及天麻素干预对AngⅡ-NOX2/SirT3信号通路的影响,探讨天麻素对活化星形胶质细胞的作用及相关机制。[方 法]将体外培养的TNC-1星形胶质细胞随机分为正常对照组(Control),LPS直接激活组(LPS组),不同浓度天麻素直接干预组(Gd50 mg/L、Gd100 mg/L、Gd200mg/L),BV-2小胶质细胞的条件培养基(CM)组,LPS激活BV-2小胶质细胞的条件培养基(CM+LPS)组,CM+LPS+天麻素间接干预低剂量(GiL)组(CM+LPS+GiL),CM+LPS+天麻素间接干预高剂量(GiH)组(CM+LPS+GiH),CM+LPS+阿齐沙坦组(CM+LPS+A)和CM+LPS+阿齐沙坦+GiL共同处理组(CM+LPS+A+GiL)。应用MTS法检测天麻素对TNC-1星形胶质细胞活性的影响。应用免疫荧光双标染色、免疫蛋白质印迹分析(Western Blot)两种方法检测体外活化的星形胶质细胞中血管紧张素转化酶(ACE)、AT1受体、NOX2、SirT3,营养因子BDNF和IGF-1的表达及天麻素干预对这些蛋白表达的影响;同时,通过应用Western Blot分析检测天麻素对TNC-1星形胶质细胞活化后炎性介质(iNOS、TNF-α)表达的作用。[结 果](1)Western Blot结果显示,LPS组中炎性因子TNF-α的表达较正常组无统计学意义(p>0.05),CM+LPS组中TNF-α的表达较CM组明显增高(p<0.05)。(2)Western Blot结果显示,用50 mg/L、100 mg/L、200mg/L不同浓度天麻素直接干预TNC-1星形胶质细胞后,SirT3的蛋白表达水平几乎无变化(p>0.05)。(3)Western Blot结果显示,分别用低剂量天麻素和高剂量天麻素间接干预TNC-1星形胶质细胞后,iNOS和TNF-α表达明显减低,与CM+LPS组比较有显著的统计学差异(p<0.05)。(4)Western Blot结果显示,CM+LPS组中活化的TNC-1星形胶质细胞所表达的血管紧张素相关蛋白ACE和AT1、SirT3和NOX2较CM组均明显升高(p<0.05);通过应用天麻素间接干预细胞后,ACE、AT1和NOX2的表达明显减少(p<0.05),而细胞表达的SirT3、IGF-1、BDNF进一步上调(p<0.05)。免疫荧光结果与Western Blot结果相一致。(5)Western Blot检测结果显示:CM+LPS+A(用AT1受体抑制剂阿齐沙坦干预活化的星形胶质细胞)组与CM+LPS组相比,发现用阿奇沙坦处理活化的星形胶质细胞后,星形胶质细胞中NOX2的表达被明显抑制(p<0.05),且下调iNOS和TNF-α的蛋白表达(p<0.05);而SirT3的表达则进一步升高(p<0.05);用CM+LPS+A+GiL组分别与CM+LPS+A和CM+LPS+GiL组相比,细胞中iNOS、TNF-α和NOX2表达都发生明显下调(p<0.05),而SirT3的表达也显著增加(p<0.05)。[结 论]①活化的星形胶质细胞中血管紧张素系统相关蛋白(ACE和AT1)、NOX2、SirT3、炎性因子iNOS和TNF-α以及营养因子IGF-1、BDNF蛋白表达显著增加;②活化的星形胶质细胞中iNOS、TNF-α、NOX2炎性蛋白的表达可被AT1受体阻断剂阿齐沙坦有效抑制,而上调细胞保护因子SirT3的表达;③天麻素可能通过AngⅡ-AT1-NOX2/SirT3信号通路,抑制星形胶质细胞活化,促进SirT3和营养因子IGF-1、BDNF的表达,发挥神经保护作用。④星形胶质细胞的活化及天麻素对其的保护作用可能是通过小胶质细胞介导完成的,它们之间存在着Cross-talking的相互关系。