长链非编码RNA H19在胃癌中作用及调控机制的研究

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背景:胃癌是最常见的消化道肿瘤,发病率高,预后差。长链非编码RNA(lncRNA)在肿瘤的发生、发展中起着极其重要的作用。课题前期研究发现lncRNA H19在胃癌组织中高表达,来源于H19第一个外显子的miR-675在胃癌组织中表达与H19一致,两者呈正相关。方法:本课题对74对胃癌组织H19和miR-675表达水平进行定量real-time PCR分析,收集患者各项临床病理资料并随访患者生存期(随访9-53个月,中位27个月),进行相关性分析;分别构建H19和miR-675在MKN45细胞株敲低表达模型MKN45(KD)和SGC-7901细胞株的过表达模型SGC-7901(OE),运用CCK8细胞增殖、Transwell迁移、侵袭、划痕愈合等细胞学实验以及裸鼠动物实验研究H19和miR-675对于细胞生物学行为的影响;对表达谱芯片中差异基因进行筛选,结合KEGG数据库和基因功能数据库分析,构建H19共表达网络,运用RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)技术和双荧光素酶报告基因(DLR)系统结合Western免疫印迹和免疫组化,研究H19和miR-675的调控机制。结果:通过对74例胃癌手术患者的随访,结合临床病理资料分析,发现H19和miR-675在胃癌组织中表达显著升高,且H19表达水平是影响胃癌患者预后的因素之一。高表达与低表达患者的总生存期(OS)的差异有显著的统计学意义(p=0.036);对MKN45(KD)模型和SGC7901(OE)模型的细胞学及动物实验显示,过表达H19和miR-675可以显著增强细胞的增殖、迁移、侵袭以及成瘤能力;相反地,敲低H19和miR-675的表达,细胞的增殖、迁移、侵袭以及成瘤能力显著减弱。根据H19基因共表达网络,将可能与H19存在相互作用的候选基因,通过RIP实验发现ISM1是与H19相互作用的靶基因,H19与ISM1的表达呈正相关;DLR实验发现CALN1是miR-675的靶基因,miR-675与CALN1的表达呈负相关。结论:H19在胃癌组织中表达较正常组织显著升高,单因素分析显示H19是影响胃癌患者预后的因素之一;过表达H19可以显著增强胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭、成瘤以及转移等恶性生物行为;H19和miR-675的表达一致,呈正相关,但是两者的生物学功能并不吻合,H19的功能不仅仅是作为miR-675的前体通过miR-675发挥作用。ISM1是H19的靶基因;CALN1是miR-675的靶基因。H19和miR-675在胃癌发生发展中其关键的作用,有望成为胃癌靶向治疗的潜在治疗靶点。
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