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目的：
观察H2S供体对癫痫大鼠行为学及脑电的影响，检测AQP4和p65的表达及IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，用PKC抑制剂干预后观察H2S供体对癫痫发作的影响，探究H2S通过激活PKC下调AQP4抑制癫痫的炎症机制。
方法：
第一部分：成年雄性SD大鼠随机分为4组：①正常对照组（Control）;②癫痫组（EP）;③硫化氢供体对照组（H2SDonor）;④硫化氢供体干预组（H2SDonor+EP）。侧脑室注射H2S供体预处理4h后腹腔注射戊四氮，观察大鼠行为学表现及脑电图的变化，去蛋白法检测海马组织中H2S浓度，qRT-PCR、Westernblot检测CBSmRNA、蛋白表达。
第二部分：成年雄性SD大鼠随机分为6组：①对照组（Control）;②IL-1β0h组（0h）;③IL-1β12h组（12h）;④IL-1β24h组（24h）;⑤IL-1β48h组（48h）;⑥IL-1β72h组（72h）。侧脑室注射IL-1β，观察大鼠行为学表现及脑电图的变化，qRT-PCR和Westernblot检测大鼠脑海马组织不同时间点AQP4表达变化。
第三部分：成年雄性SD大鼠随机分为5组：①对照组（Control）;②癫痫组（EP）;③硫化氢供体对照组（H2SDonor）;④硫化氢供体干预组（H2SDonor+EP）;⑤硫化氢供体+PKC抑制剂干预组（H2SDonor+Go6983+EP）。侧脑室注射500μMH2S供体或500μMH2S供体+Go6983，预处理4h后，腹腔注射戊四氮，观察大鼠行为学表现及脑电图的变化，免疫组化检测AQP4、PKC、p65的表达，qRT-PCR和Westernblot检测各组大鼠脑海马组织AQP4、PKC、p65的表达，ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α的水平。
结果：
第一部分：
行为学观察结果：Control组、H2SDonor组无癫痫发作，EP组大鼠出现癫痫发作，发作级别为Ⅳ～Ⅴ级，H2SDonor+EP组发作级别为Ⅰ～Ⅱ级。
脑电图结果：Control组、H2SDonor组为正常脑电波形，EP组可记录到明显的尖波、棘波、棘-慢波等痫样波；H2SDonor+EP组与EP组相比，痫样波频率减少，波幅减小。
去蛋白法检测H2S浓度结果：EP组、H2SDonor组、H2SDonor+EP组大鼠海马H2S浓度均明显增多，其中H2SDonor+EP组H2S浓度最高。
qRT-PCR、Westernblot结果：EP组、H2SDonor组与H2SDonor+EP组大鼠海马CBSmRNA、蛋白表达增高，其中H2SDonor+EP组CBSmRNA、蛋白表达最高。
第二部分：
行为学观察结果：Control组大鼠无癫痫发作，侧脑室注射IL-1β后大鼠出现癫痫发作，发作级别为Ⅲ～Ⅳ级。
脑电图结果：Control组为正常脑电波形，IL-1β组记录到痫样波。
qRT-PCR、Westernblot结果：与Control组相比，侧脑室注射IL-1β后12h、24h、48h、72h的大鼠海马组织中AQP4mRNA、蛋白表达增多，并呈现先上升后下降的趋势，于24h时AQP4mRNA、蛋白表达最高，随后下降，但72h时AQP4的表达的仍高于Control组。
第三部分：
行为学观察结果：Control组、H2SDonor组无癫痫发作，EP组大鼠出现癫痫发作，发作级别为Ⅳ～Ⅴ级；H2SDonor+EP组比EP组发作潜伏期长，持续时间短，发作级别降低，为Ⅰ～Ⅱ级；H2SDonor+Go6983+EP组比H2SDonor+EP组发作潜伏期短，持续时间长，发作级别升高，为Ⅲ～Ⅳ级。
脑电图结果：Control组、H2SDonor组为正常脑电波形，EP组可记录到明显的尖波、棘波、棘-慢波等痫样波；H2SDonor+EP组与EP组相比，痫样波频率减少，波幅减小；H2SDonor+Go6983+EP组比H2SDonor+EP组痫样波出现频率增多，波幅较大。
免疫组化结果：EP组PKC阳性细胞数目减少，AQP4、p65阳性细胞数目增多；H2SDonor组PKC阳性细胞数目增多，AQP4、p65阳性细胞数目减少；与比EP组相比，H2SDonor+EP组PKC阳性细胞数目增多，AQP4、p65阳性细胞数目减少；与H2SDonor+EP组相比，PKC阳性细胞数目减少，AQP4、p65阳性细胞数目增多。
qRT-PCR、Westernblot结果：EP组PKCmRNA、蛋白表达减少，AQP4、p65mRNA、蛋白表达增多；H2SDonor组PKCmRNA、蛋白表达增多，AQP4、p65mRNA、蛋白表达减少；H2SDonor+EP比EP组PKCmRNA、蛋白表达增多，AQP4、p65mRNA、蛋白表达减少，H2SDonor+Go6983+EP组比H2SDonor+EP组PKCmRNA、蛋白表达减少，AQP4、p65mRNA、蛋白表达增多。
ELISA结果：EP组炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高；H2SDonor组炎症因子水平降低；H2SDonor+EP与EP组相比炎症因子水平降低；H2SDonor+Go6983+EP组与H2SDonor+EP组相比炎症因子水平升高。
结论：
1、IL-1β可能通过上调AQP4的表达诱导癫痫发作。
2、H2S可能通过激活PKC下调AQP4，减少炎症因子的释放，抑制癫痫发作。
观察H2S供体对癫痫大鼠行为学及脑电的影响，检测AQP4和p65的表达及IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，用PKC抑制剂干预后观察H2S供体对癫痫发作的影响，探究H2S通过激活PKC下调AQP4抑制癫痫的炎症机制。
方法：
第一部分：成年雄性SD大鼠随机分为4组：①正常对照组（Control）;②癫痫组（EP）;③硫化氢供体对照组（H2SDonor）;④硫化氢供体干预组（H2SDonor+EP）。侧脑室注射H2S供体预处理4h后腹腔注射戊四氮，观察大鼠行为学表现及脑电图的变化，去蛋白法检测海马组织中H2S浓度，qRT-PCR、Westernblot检测CBSmRNA、蛋白表达。
第二部分：成年雄性SD大鼠随机分为6组：①对照组（Control）;②IL-1β0h组（0h）;③IL-1β12h组（12h）;④IL-1β24h组（24h）;⑤IL-1β48h组（48h）;⑥IL-1β72h组（72h）。侧脑室注射IL-1β，观察大鼠行为学表现及脑电图的变化，qRT-PCR和Westernblot检测大鼠脑海马组织不同时间点AQP4表达变化。
第三部分：成年雄性SD大鼠随机分为5组：①对照组（Control）;②癫痫组（EP）;③硫化氢供体对照组（H2SDonor）;④硫化氢供体干预组（H2SDonor+EP）;⑤硫化氢供体+PKC抑制剂干预组（H2SDonor+Go6983+EP）。侧脑室注射500μMH2S供体或500μMH2S供体+Go6983，预处理4h后，腹腔注射戊四氮，观察大鼠行为学表现及脑电图的变化，免疫组化检测AQP4、PKC、p65的表达，qRT-PCR和Westernblot检测各组大鼠脑海马组织AQP4、PKC、p65的表达，ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α的水平。
结果：
第一部分：
行为学观察结果：Control组、H2SDonor组无癫痫发作，EP组大鼠出现癫痫发作，发作级别为Ⅳ～Ⅴ级，H2SDonor+EP组发作级别为Ⅰ～Ⅱ级。
脑电图结果：Control组、H2SDonor组为正常脑电波形，EP组可记录到明显的尖波、棘波、棘-慢波等痫样波；H2SDonor+EP组与EP组相比，痫样波频率减少，波幅减小。
去蛋白法检测H2S浓度结果：EP组、H2SDonor组、H2SDonor+EP组大鼠海马H2S浓度均明显增多，其中H2SDonor+EP组H2S浓度最高。
qRT-PCR、Westernblot结果：EP组、H2SDonor组与H2SDonor+EP组大鼠海马CBSmRNA、蛋白表达增高，其中H2SDonor+EP组CBSmRNA、蛋白表达最高。
第二部分：
行为学观察结果：Control组大鼠无癫痫发作，侧脑室注射IL-1β后大鼠出现癫痫发作，发作级别为Ⅲ～Ⅳ级。
脑电图结果：Control组为正常脑电波形，IL-1β组记录到痫样波。
qRT-PCR、Westernblot结果：与Control组相比，侧脑室注射IL-1β后12h、24h、48h、72h的大鼠海马组织中AQP4mRNA、蛋白表达增多，并呈现先上升后下降的趋势，于24h时AQP4mRNA、蛋白表达最高，随后下降，但72h时AQP4的表达的仍高于Control组。
第三部分：
行为学观察结果：Control组、H2SDonor组无癫痫发作，EP组大鼠出现癫痫发作，发作级别为Ⅳ～Ⅴ级；H2SDonor+EP组比EP组发作潜伏期长，持续时间短，发作级别降低，为Ⅰ～Ⅱ级；H2SDonor+Go6983+EP组比H2SDonor+EP组发作潜伏期短，持续时间长，发作级别升高，为Ⅲ～Ⅳ级。
脑电图结果：Control组、H2SDonor组为正常脑电波形，EP组可记录到明显的尖波、棘波、棘-慢波等痫样波；H2SDonor+EP组与EP组相比，痫样波频率减少，波幅减小；H2SDonor+Go6983+EP组比H2SDonor+EP组痫样波出现频率增多，波幅较大。
免疫组化结果：EP组PKC阳性细胞数目减少，AQP4、p65阳性细胞数目增多；H2SDonor组PKC阳性细胞数目增多，AQP4、p65阳性细胞数目减少；与比EP组相比，H2SDonor+EP组PKC阳性细胞数目增多，AQP4、p65阳性细胞数目减少；与H2SDonor+EP组相比，PKC阳性细胞数目减少，AQP4、p65阳性细胞数目增多。
qRT-PCR、Westernblot结果：EP组PKCmRNA、蛋白表达减少，AQP4、p65mRNA、蛋白表达增多；H2SDonor组PKCmRNA、蛋白表达增多，AQP4、p65mRNA、蛋白表达减少；H2SDonor+EP比EP组PKCmRNA、蛋白表达增多，AQP4、p65mRNA、蛋白表达减少，H2SDonor+Go6983+EP组比H2SDonor+EP组PKCmRNA、蛋白表达减少，AQP4、p65mRNA、蛋白表达增多。
ELISA结果：EP组炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高；H2SDonor组炎症因子水平降低；H2SDonor+EP与EP组相比炎症因子水平降低；H2SDonor+Go6983+EP组与H2SDonor+EP组相比炎症因子水平升高。
结论：
1、IL-1β可能通过上调AQP4的表达诱导癫痫发作。
2、H2S可能通过激活PKC下调AQP4，减少炎症因子的释放，抑制癫痫发作。