苦豆子(Sophora alopecuroides L)是豆科槐属多年生草本植物,其主要分布于我国西北新疆、宁夏等地区。生物碱是苦豆子的主要成分,具有抗肿瘤、抗氧化、神经保护等多种药理作用。DNA拓扑异构酶Ⅰ(topoisomeraseⅠ)广泛存在于真核生物和原核生物中,是一个重要的抗肿瘤靶点,通过抑制其活性,达到抗肿瘤的目的。本文以苦豆子生物碱为研究对象,对其生物碱的提取分离、TopⅠ抑制剂的靶向筛选以及生物碱药理活性进行了研究,主要内容如下:1、苦豆子生物碱成分的分离纯化:对新疆苦豆子果实部位进行了提取、分离和纯化,通过多种柱层析(硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、C18反向硅胶柱)和重结晶等方法,利用理化鉴别及核磁共振波谱技术(NMR)鉴定了在氯仿部位分离得到5个生物碱,其中4个为苦参型生物碱分别是苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱和1个金雀花碱型生物碱,金雀花碱。2、TopⅠ抑制剂的靶向筛选及其反应条件的确定:以游离TopⅠ酶为靶点,利用亲和超滤(UF)结合超高效液相-质谱(UPLC-QTOF-MS)技术从苦豆子提取液中筛选鉴定了6个TopⅠ抑制剂,分别是苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、槐胺碱和金雀花碱。其中,槐定碱为生物碱类TopⅠ抑制剂。3、对所筛选出的生物碱进行药理活性实验:为了对筛选出的生物碱进一步确认其抗肿瘤活性,经初步药理作用筛选,选择了苦参碱和金雀花碱为实验组,以已被报道的槐定碱为对照组,以人乳腺癌MDA-MB-468细胞系为对象进行体外肿瘤细胞抑制实验。结果表明3种生物碱都具有抑制MDA-MB-468细胞增殖能力,且抑制作用随作用时间和给药浓度的增加而增长,在倒置显微镜下观察细胞形态变化明显,细胞皱缩,破裂,细胞膜发泡,细胞间隙增大等,表明细胞处于凋亡状态。