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本文研究了天山雪莲内生真菌及其对宿主的作用,包括内生真菌的分离、培养和分子鉴定、内生真菌对天山雪莲幼苗生长和形态的作用、愈伤组织的诱导培养及内生真菌对愈伤组织的作用、天山雪莲的组培快繁、悬浮培养细胞系的建立和真菌诱导子的作用。 天山雪莲的根段,用10%KOH解离,萃酚兰或酸性品红染色,标本片置光学显微镜下观察,可观察到Dark Septate Endophyte(DSE)真菌的典型结构(细胞内的菌丝和微菌核)和VA菌根菌的典型结构(丛枝,菌丝卷,泡囊)共同存在。 从天山雪莲体内分离出40种内生真菌,其中根中DSE真菌有9种。选择根中的9种DSE真菌和叶中的3种内生真菌在琼脂培养基上和蛭石基质上接种雪莲幼苗,在选择的12种内生真菌中,EF-11、15、27、38、40、41在琼脂培养基上很快吞噬幼苗,其中EF-11、27、40、41真菌在蛭石基质上也很快吞噬幼苗,说明它们可能是雪莲的病原菌;而EF-15、38在蛭石基质上比较温和,且EF-15有明显的促生作用。表明在不同的实验条件下,真菌和宿主的生长状态不同,最终会导致二者之间关系的变化。EF-17、18、32、60在琼脂培养基中生长非常的慢,菌落致密,扩展缓慢,在与雪莲幼苗共培养25d时,对幼苗的生长无影响,但后期抑制幼苗的生长;而在蛭石基质上,这些菌生长的非常快,从而也导致它们对幼苗的作用发生变化。只有EF-37不论在蛭石基质上或琼脂培养基上对雪莲幼苗表现出促进作用,表现为叶柄叶片比对照极大的伸长,根的分支增多,幼苗的干重比对照显著的增加。EF-M真菌在两者培养基上的表现也较一致,在蛭石基质培养基上对幼苗有明显的促生作用。 对其中的两种EF-37、M和叶中分离的真菌EF-15进行分子鉴定,EF-37是Mycocentrospora真菌,EF-M是Leptodontidium属的真菌,而EF-15为Glomerella真菌。其中与EF-M相似性最大的Leptodontidium orchidicola是被描述和研究最多的DSE之一。