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研究背景人体是一个与微生物共生的场所,身体的各个部位包括肠道、呼吸道、泌尿生殖道等均有微生物的定植。在人类胃肠道中有超过1014种微生物,微生物所具有的遗传物质是人类基因组的100倍,微生物组是人类遗传不可或缺的一部分。同时人体的微生物组被认为是与人体健康密切相关的“活跃器官”。它们可防止病原体入侵,激活我们的免疫细胞,促进各种代谢功能,并通过这些基本功能直接或间接影响我们的大多数生理功能。溃疡性结肠炎(UC)与克罗恩病(CD)统称为炎症性肠病(IBD)。溃疡性结肠炎的主要症状是脓血便,复发和缓解交替出现。UC的病因和发病机制庞杂,有研究认为是由肠道菌群和黏膜的免疫力之间不平衡造成的,从而导致过度的炎症。因此,肠道菌群营养不良被认为是UC的发病机理之一。即便肠道菌群不平衡不是肠黏膜恶化的主要原因,它仍然被认为是肠黏膜炎症的潜在原因,或者至少起到增强剂的作用。粪菌移植(FMT)是指将健康人的粪便提取微生物菌群转移到患者的肠道中去。这已成为改变肠道微生物组的新方法,并已成功应用于难治性梭状芽胞杆菌感染(CDI)的治疗当中。FMT可以通过增加肠道微生物群的多样性和增加丢失的有益菌来对抗生态失调。有很多研究表明补充益生菌也是改善免疫系统和肠道粘膜屏障的功能的有效措施。益生菌有利于纠正肠道微生态失调,促进抗炎因子的分泌,从而抑制有害细菌的生长。慢性肾脏疾病(CKD)是包括肥胖症和Ⅱ型糖尿病在内的代谢疾病常见的并发症之一,被称为全球性的健康问题。越来越多的研究表明,细菌代谢物,例如酚、吲哚和胺可能会引起尿毒症。终末期肾病患者表现出具有丁酸盐形成酶的家族减少,而具有脲酶、尿酸酶、吲哚和对甲酚形成酶的细菌家族则增加。我们课题组在前期实验中使用16SrRNA高通量测序方法研究了 CKD组和正常健康人(HC)组之间肠道菌群的差异。我们发现,在属的水平上,CKD组中有12种系统型过高,HC组中有19种系统型过高。研究还发现Holdemanella,Megamonas,Dielma和Scardovia,Anaerofustis菌属与CKD和血液透析的进展相关。研究目的1.通过Meta分析了解粪菌移植和混合益生菌VSL#3在诱导溃疡性结肠炎达到临床缓解的效果。2.通过对中重度溃疡性结肠炎患者行粪菌移植治疗的病例系列报道,了解粪菌移植在诱导中重度溃疡性结肠炎患者达到临床缓解中的作用。3.根据前期研究肾衰患者肠道微生物改变的16S rRNA测序结果,设计有意义的属水平的特异性引物,建立微生物标记物,通过提取患者粪便DNA,经过简单的PCR实验,便可对慢性肾脏病患者的病情评估,实现早发现,早干预的目的。研究方法1.根据系统评价和荟萃分析的首选报告项目(PRISMA)声明,对溃疡性结肠炎粪菌移植治疗和混合益生菌治疗进行系统评价和荟萃分析。2.研究准备了来自四个供体的粪便提取物对中重度溃疡性结肠炎患者进行输注。每次输注的体积为90 mL。使用溃疡性结肠炎疾病活动指数(UCDAI)评估进行粪菌移植后患者的病情。使用首次粪便移植的第1、6、12、52周的简单临床结肠炎活动指数(SCCAI)评估患者的病情及生活质量。3.本研究选取30例健康对照组(HC)人群和95例慢性肾脏病组(CKD)患者根据是否进行血液透析分为三组。对健康对照组30例、慢性肾脏病非透析组(CKD-NonHD)34例、慢性肾脏病透析组(CKD-HD)61例患者收集的大便样本进行编号。利用粪便DNA提取试剂盒提取DNA后,采用实时荧光定量PCR和普通PCR方法测定大便DNA中3种肠道菌属并分析作为慢性肾脏病患者微生物标记物诊断疾病的特异性和敏感性。研究结果1.七项随机、双盲、安慰剂对照试验被用作诱导缓解数据的来源。FMT和益生菌治疗均优于安慰剂。间接比较显示粪便微生物群移植和益生菌VSL#3在临床缓解(RR=1.20,95%CI=0.70-2.06)或临床反应(RR=0.95,95%CI=0.62-1.45)中均未达到统计学意义。在安全性方面,与对照组相比,粪便微生物群移植(OR=1.15,95%CI=0.51-2.61)和 VSL#3(OR=0.90,95%CI=0.33-2.49)显示不良事件没有统计学上的显着增加。就严重不良事件而言,粪便菌群移植组与对照组之间无统计学差异(OR=1.29,95%CI=0.46-3.57)。益生菌VSL#3似乎比粪便微生物群移植更安全,因为在VSL#3文章中没有报道严重的不良事件。2.在进行了多次FMT的12例中重度溃疡性结肠炎患者中,有11例患者获得了临床缓解,其中有5例在52周随访时仍处于临床缓解状态;6名患者在达到临床缓解后,52周内复发;只有1例患者对FMT无反应。复发后有4例患者再次接受了 FMT,但重新应用FMT并没有达到预期的效果。此外,所有患者均具有良好的依从性,且随访期间在FMT后均未观察到不良事件。3.三个肠道菌属对尿毒症患者合并诊断的阳性率为73.8%,对CKD非透析患者合并诊断的阳性率为30.8%,对总CKD患者合并诊断的阳性率为62.1%。研究结论1.粪菌移植或混合益生菌VSL#3在活动性溃疡性结肠炎的临床缓解和临床反应中均取得了良好的效果,并且没有增加不良反应的风险。粪便微生物群移植的治疗效果与混合益生菌VSL#3的治疗效果无统计学差异。2.多次连续FMT对中重度UC患者有效而且安全。但是需要双盲,随机对照试验和更好的方法来了解为什么FMT治疗复发后效果不佳。3.与健康人群相比慢性肾脏病患者肠道菌群结构发生了改变,Scardovia、Dielma、Anaerofustis可以作为慢性肾脏病患者的微生物标记物。