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背景和目的:弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中最常见的临床亚型,据统计其发病率约占侵袭性淋巴瘤的40%以上。DLBCL具有高度的侵袭性和异质性,其形态学、免疫表型、基因型及临床表现等都表现出很大的差异。治疗上主要是联合化疗及利妥昔单抗等生物靶向治疗,虽然取得了较高的临床缓解率及生存率,但是仍有大于30%的DLBCL患者在经过一线标准治疗后难治或复发。目前临床上有效预测弥漫大B细胞淋巴瘤患者疗效或复发的指标是国际预后指数(IPI),但该评分系统为多项临床指标的结合,不能很好的反映肿瘤细胞的分子生物学异质性。因此,急需完善DLBCL患者预后评估体系以指导临床治疗。近年来,越来越多的研究表明DLBCL的发生、发展与微小RNA(micro RNA,miRNA)密切相关。本课题组前期利用基因芯片扫描技术发现micro RNA-296-5p(miRNA-296-5p)在DLBCL中表达量显著高于淋巴结反应性增生组织,后又利用RT-q PCR技术在12例DLBCL石蜡标本和83例淋巴结反应性增生组织石蜡标本中验证了这一结论。鉴于此,本实验主要研究miRNA-296-5p在弥漫大B细胞株中的表达情况及其可能在肿瘤发生、发展中所发挥的作用。方法:(1)抽取50例健康志愿者的外周血,加外周血细胞分离液,一定温度下多次离心,分离出单个核细胞后提取RNA,运用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-q PCR)技术检测在单个核细胞与三株DLBCL细胞中miRNA-296-5p表达情况;(2)根据miRNA-296-5p的序列合成miRNA-296-5p inhibitor及其阴性对照,将合成的miRNA-296-5p inhibitor及其阴性对照转染入DLBCL细胞株SUL、DB、OCI-LY10中,通过RT-q PCR方法检测miRNA-296-5p的表达量,摸索出最合适的转染浓度值;(3)按最合适的转染浓度转染SUL、DB细胞,利用CCK-8法检测SUL、DB细胞转染miRNA-296-5p inhibitor 24、48、72h后对细胞增殖能力的影响;(4)运用Transwell迁移实验检测DB细胞转染miRNA-296-5p inhibitor后细胞迁移能力的变化;(5)采用流式细胞术检测DB细胞转染miRNA-296-5p inhibitor后细胞的凋亡率;(6)通过RT-q PCR法和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)法检测转染后P53和PLK1的m RNA及其蛋白的表达情况,推测miRNA-296-5p影响肿瘤发生发展可能的机制蛋白。结果:(1)SUL,DB,OCI-LY10细胞中miRNA-296-5p的表达量明显高于外周血单个核细胞;(2)经过转染后提取细胞RNA做RT-q PCR检测发现,miRNA-296-5p inhibitor组miRNA-296-5p的表达显著下调(P<0.01),miRNA-296-5p inhibitor NC组miRNA-296-5p的表达无明显变化(P>0.05);(3)用CCK-8法检测阴性对照组和干扰组在培养24、48和72 h的增殖情况后,miRNA-296-5p inhibitor组的OD值随着时间推移增长的速度较control组和miRNA-296-5p inhibitor NC组明显减慢(P<0.05),control组和miRNA-296-5p inhibitor NC组OD值增长的差异无统计学意义;(4)Transwell迁移小室检测结果表明,miRNA-296-5p inhibitor组细胞穿过的数目显著少于control组和miRNA-296-5p inhibitor NC组(P<0.01),而control组和miRNA-296-5p inhibitor NC组穿过的细胞数目无明显差别(P>0.05);(5)流式细胞术检测结果表明,control、miRNA-296-5p inhibitor NC和miRNA-296-5p inhibitor 3组细胞之间的细胞凋亡水平在统计学上有差异(P<0.05);(6)P53和PLK1的m RNA及其蛋白在转染前后并没有明显的变化。结论:(1)Mi RNA-296-5p在DLBCL细胞株中是高表达的。(2)抑制DLBCL细胞miRNA-296-5p的表达可降低肿瘤细胞的增殖和迁移能力,同时也使肿瘤细胞的凋亡率发生轻微的上升。(3)抑制DLBCL细胞miRNA-296-5p的表达后,TP53和PLK1的m RNA和蛋白表达没有发生明显的变化,可能并不是miRNA-296-5p作用的直接靶基因。