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目的:评价血清淀粉样蛋白A(SAA)与错误折叠的转甲状腺素蛋白(TTR)对复发/难治弥漫大B细胞淋巴瘤(R/R-DLBCL)的预测价值,为及早诊断R/R-DLBCL提供新的、特异而敏感的血清标志物,为优化诊疗策略提供依据,为发现新的蛋白治疗靶点、开发新的靶向药物奠定基础。方法:1复发/难治DLBCL特异血清蛋白的分离、鉴定及临床价值研究:2013年03月-2015年09月山西大医院淋巴肿瘤科收治有完整资料的60例患者,R/R-DLBCL患者30例作为研究组,缓解/稳定DLBCL患者20例及10例慢性淋巴结炎患者作为对照组,健康体检者10例作为阴性对照。留取患者治疗前空腹血清3ml,应用SELDI技术寻找复发/难治淋巴瘤的特异蛋白质指纹;应用Tris-Tricine十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(Tris-Tricine-SDS-PAGE)技术测定比较血清差异肽段;shotgun串联质谱混合蛋白质鉴定技术(shotgun-LTQ-MS)对差异条带进行蛋白质多肽鉴定;运用生物信息学技术对鉴定蛋白质进行分析,确定蛋白结构与功能;统计分析血清中高表达SAA及错误折叠TTR的蛋白与R/R-DLBCL患者临床病理特征、生存期的关系。采用SPSS21.0软件,卡方检验分析临床计数资料,Kaplan-Meier曲线进行生存分析,Log-Rank检验比较单因素生存差异(P<0.05为差异有显著性)。2 SAA、TTR对复发/难治DLBCL预测价值的研究:2016年9月至2017年12月山西大医院淋巴肿瘤科收治的初治72例DLBCL,留取患者治疗前空腹血清3ml,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定患者血清SAA及TTR水平。R-CHOP/R-EPOCH方案化疗6周期后随访评价疗效:R/R-DLBCL患者43(43/72)例,缓解/稳定DLBCL患者29(29/72)例。统计分析SAA及TTR水平对R/R-DLBCL的预测价值。采用SPSS 21.0软件统计分析,计量资料以均数±标准差((?)±s)表示,对方差齐及符合正态分布的数据进行方差分析,独立样本t检验;不满足正态分布的数据采用两独立样本的非参数检验;采用二分类logistic回归分析危险因素(以P<0.05为差异有统计学意义)。绘制ROC曲线并用抛物线估算法计算出曲线下面积,比较各指标的准确性,选择预测准确性最强的指标,分点计算其敏感度、特异度及约登指数,找出约登指数最大的切点作为截断值。结果:1复发/难治DLBCL特异血清蛋白的分离、鉴定及临床价值研究:1.1经Tris-Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳,30例R/R-DLBCL患者与缓解/稳定DLBCL患者、慢性淋巴结炎患者、健康人对照组血清比较,出现不同差异条带,R/R-DLBCL患者有效鉴定出5种差异肽段。其中高表达两条:A带:分子量约12000Da;B带:分子量约14000Da;其中低表达三条:C带:分子量约10000Da;D带:分子量约15000-20000Da;E带:分子量约15000Da。1.2其中A带和B带在缓解/稳定DLBCL患者、慢性淋巴结炎组和健康组表达弱或未表达。Shotgun-LTQ-MS鉴定结果:A带为血清淀粉样蛋白A(SAA1/2),B带为错误折叠的转甲状腺素蛋白(TTR)。1.3对高表达SAA、错误折叠TTR蛋白的R/R-DLBCL患者,进行临床病理特征相关分析及生存期分析:SAA蛋白高表达(SAA~+)与R/R-DLBCL患者B症状、高LDH显著相关,(P=0.02、P=0.011);SAA~+与non-GCB分型相关(Φ相关系数=0.390),与C-MYC、BCl-2、BCl-6、Ki67、双/三表达无关;TTR蛋白高表达(TTR~+)与R/R-DLBCL患者高LDH、结外病变显著相关(P=0.028、P=0.003);TTR~+与C-MYC表达、non-GCB分型相关(Φ相关系数=0.305、0.385),与BCl-2、BCl-6、Ki67、双/三表达无关。SAA与TTR蛋白同时高表达(SAA~+TTR~+)与R/R-DLBCL患者结外病变、LDH、NCCN-IPI评分显著相关(P=0.017、P=0.017、P=0.004);SAA~+TTR~+与患者的non-GCB分型相关(Φ相关系数=0.538),与BCl-2、C-MYC、BCl-6、Ki67、双/三表达无关。1.4生存期分析:SAA~+组、TTR~+组及SAA~+TTR~+组患者较阴性组生存期缩短,统计分析有显著差异,分别为P=0.001,P=0.034,P=0.003;2 SAA、TTR对复发/难治DLBCL预测价值的研究:2.1初治DLBCL组SAA及TTR水平分别为20.18±6.70μg/mL,80.34±33.56μg/mL,均明显高于健康对照组,统计学有显著性差异,P值均<0.01;2.2化疗6周期后评估疗效:复发/难治组43例(43/72),缓解/稳定组29例(29/72);完全缓解(CR)15例(15/29),部分缓解(PR)7例(7/29),疾病稳定(SD)7例(7/29)。TTR水平在复发/难治组较缓解/稳定组显著升高,差异具有统计学意义(P=0.003)。TTR曲线下面积(AUC)为0.707,在约登指数为0.492取到截断值66.63μg/m L,该点的灵敏度与特异度均较好,灵敏度为0.837,特异度为0.655;SAA水平在复发/难治组和缓解/稳定组中无显著性差异(P=0.897),AUC为0.511;2.3 SAA联合TTR水平在复发/难治组和缓解/稳定组中有显著性差异,AUC为0.704,约登指数为0.481取到截断值,该点的灵敏度与特异度较好,灵敏度为0.791,特异度为0.690。结论:1 SAA及错误折叠的TTR二者均与R/R-DLBCL预后不良相关;SAA及错误折叠的TTR在R/R-DLBCL均显著高表达,均与患者高LDH、non-GCB分型显著相关;之外,SAA与患者B症状显著相关,TTR与患者C-MYC表达、结外病变显著相关;2 SAA及TTR在初治DLBCL患者较健康体检者均高表达;初治DLBCL患者血清TTR水平>66.63μg/mL时,对预测患者进展为复发/难治有价值,敏感度83.7%,特异度65.5%。