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猪圆环病毒(Porcine circoviru，PCV)是迄今为止发现的最小动物病毒之一，分为两型：PCV1和PCV2，二者都属于圆环病毒属。PCV2被认为是猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的病原，而PMWS给世界养猪业造成了巨大的经济损失，因此PCV2成为研究的热点。本研究从具有PMWS临床及病理变化的淋巴结中克隆得到PCV2的全基因组序列，构建了PCV2突变体的感染性克隆；同时，本研究还克隆了PCV2 ORF1基因，并在E.coli中成功表达。根据GenBank中已发表的PCV2全基因序列，设计一对特异性引物，用PCR方法直接从病料中扩增出PCV2的全基因组序列，将扩增片段克隆于pGEM-T easy载体进行测序，结果表明PCV2基因组全长为1767bp，命名为ZHEJIANG2006(GenBank登录号EF210106)。应用DNAstar序列分析软件分析结果表明，本研究的PCV2序列与国内外其它研究中的PCV2序列密切相关，核苷酸序列同源性达95.1％—99.1％，其中ORF1和ORF2所编码的氨基酸序列与国内外其它研究中的PCV2序列比较，同源性也很高，分别为96.2％—99.7％和91.0％—98.7％。利用重叠延伸法将PCV2 ZHEJIANG2006序列中1162位T→G，1164位C→T，使其ORF2编码的氨基酸第191位Gly→Ser。突变后的全序列克隆入pBluescriptⅡSK(+)的SacI酶切位点中，构建成重组质粒pSK-PCV2(突)。其后从大量扩增的pSK-PCV2(突)酶切得到1767bp的PCV2(突)全长，体外连接环化后，用脂质体法转染PK-15细胞，并且同时转染pSK-PCV2(突)做为阴性对照。经多次传代后，用间接免疫荧光试验(IFA)证实环化的PCV2(突)基因组在细胞内能够表达。设计特异性引物扩增PCV2上长945bp的ORF1序列，并将其克隆入原核表达载体pGEX-4T-1。经测序鉴定重组质粒pGEX-4T-1-ORF1序列无误后，转化E.coliBL21进行表达。SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果表明，PCV2 ORF1基因编码产物在E.coli BL21中成功表达，在1mM IPTG诱导表达5h后达到最高值，并可被抗GST多抗特异识别，其分子量为63KDa。