论文部分内容阅读
2013年3月,在我国上海、安徽等地首次出现了人类感染新型的H7N9流感病毒。截止2018年1月25日,我国20多个省市地区共有1566人感染H7N9病毒,其中死亡人数为613人。自H5N1亚型高致病性禽流感出现之后,H7N9亚型高致病性禽流感病毒是另一个受到全球关注的病毒,该病毒不仅威胁到了人类的健康,也对家禽产业造成了巨大的损失。2017年,在我国华南地区分离了41株H7N9亚型禽流感病毒,本文中分析了这些分离株的分子特性、遗传演化及对鸡和小鼠的致病性。本研究中的41株禽流感病毒分离株的HA蛋白碱性裂解位点的氨基酸序列为PKGKRTAR↓G或PKRKRTAR↓G,符合典型的H7N9亚型高致病性禽流感的分子特征。其NA蛋白均出现69-73位氨基酸的缺失,它潜在的神经氨酸酶抑制剂耐药性位点均未出现耐药性突变。PB2蛋白推导的氨基酸序列分析发现,其627位的氨基酸均为E,是典型禽源禽流感病毒的分子特征。M2蛋白推导的氨基酸序列分析发现,所有毒株仅在第31位的氨基酸出现了与金刚烷胺耐药性相关的突变(S31N)。本研究中41株H7N9亚型禽流感病毒全基因组序列进行遗传演化分析发现,Q8等40株病毒主要位于Yangtze River Delta Lineage A、Yangtze River Delta Lineage B、Pearl River Delta lineage三个不同的进化分支,这三个进化分支是我国H7N9亚型禽流感病毒优势进化分支。Q8等40株病毒的HA基因来源于H7亚型病毒,NA基因来源于N9亚型病毒,其他六个内部基因均来源于H9N2亚型禽流感病毒,所以这些毒株由H7和H9两种亚型禽流感病毒重组而来。而Q1毒株的M基因来源于H5亚型禽流感病毒,HA基因来源于H7亚型病毒,NA基因来源于N9亚型病毒,其他五个内部基因来源于H9N2亚型病毒,所以Q1毒株是由H5、H7和H9三种亚型禽流感病毒重组而来。且本研究的41株分离株由10个基因型组成。因此,本研究中41株H7N9亚型禽流感病毒由不同亚型禽流感病毒重组而来,并且属于不同的基因型,进而呈现遗传多样性。为了研究H7N9亚型禽流感病毒对鸡致病性以及水平传播的能力,以0.1 mL108EID50/0.1 mL剂量接种SPF鸡,实验结果显示,Q8和Q9毒株接种组在接种后4天内全部死亡,在接种后第3天各个器官的复制滴度为5.57.58 log10EID50/0.1 mL;Q8和Q9毒株同居组在接种后7天内全部死亡。Q25等10株病毒以0.1 mL 106EID50/0.1mL剂量接种鸡,实验结果显示,所有毒株接种组4天内全部死亡。Q25等8株病毒接种组在接种后第2天各个器官中的复制滴度为6.589.25 log10EID50/0.1 mL,而Q28和Q43毒株在接种后第2天各个器官中的复制滴度为3.837.42 log10EID50/0.1 mL;Q43毒株同居组有2只在接种后14天内无典型临床症状之外,其余毒株的同居组在接种后7天内全部死亡。因此,2017年我国华南地区分离的H7N9亚型禽流感病毒对鸡的致病性和在鸡群中的传播能力均存在差异性。为了研究H7N9亚型禽流感病毒对小鼠的致病性,将16株病毒分别用0.05 mL106EID50/0.05 mL剂量以滴鼻的方式接种小鼠,实验结果显示所有病毒均能在小鼠肺脏中复制,且在接种后第5天的病毒复制滴度均高于第3天(16.67 log10EID50/0.1 mL,15.92 log10EID50/0.1 mL);但不同毒株在其他组织器官中的复制能力有差异,Q25、Q28和Q52毒株的在肝、脾、肺、脑中的病毒复制滴度最高(1.086.67 log10EID50/0.1mL),Q43毒株在肝、脾、肾、脑中的病毒复制滴度最低(11.58 log10EID50/0.1 mL)。因此,2017年我国华南地区分离的H7N9亚型禽流感病毒对小鼠的致病性存在差异。综上所述,本研究的41株病毒均为H7N9亚型高致病性禽流感病毒,且属于不同的基因型,进而呈现遗传多样性;大部分毒株对鸡表现为高致病性,且其在鸡群中具有较强的水平传播能力;部分毒株对小鼠表现出高的致病性。因此,本研究说明H7N9亚型禽流感病毒对家禽仍然具有较强的威胁性,同时具有在哺乳动物间传播的风险。