落葵皱缩花叶病毒紫茉莉分离物基因组序列测定及CP基因原核表达载体的构建与抗体制备

来源 :云南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:daren19112879
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本论文对侵染紫茉莉(Mirbilis jalapa L.)白勺落葵皱缩花叶病毒(Basella rugose mosaic virus, BaRMV)(BaRMV-MJ)的生物学特性开展了系统研究。测定了BaRMV的部分基因组序列、构建了BaRMV CP基因的原核表达载体,并获得了CP基因蛋白抗体。结果表明:1、受BaRMV-MJ侵染的紫茉莉均表现为花叶,部分叶片出现畸形或斑驳症状;在电镜下观察,发现该病毒粒子呈线状,大小约为13×700~800nm;接种实验表明,该病毒能够注射侵润接种,不能摩擦接种,采用注射侵润接种成功侵染本氏烟,经ELISA及RT-PCR检测表明侵染率达到76%以上。2、对BaRMV-MJ基因组序列进行了测定,完成了除5’-UTR及部分P1基因以外序列的测定工作。对测定序列进行核苷酸和氨基酸序列多重比对分析,结果显不BaRMV-MJ的蛋白切割位点中CI和6K2以及NIa-Pro和NIb的切割位点发生了变化,与蚜传相关的‘DAG’保守基序也变成了’NAG’, pipo以+2阅读框相位编码,含有典型的G GAA AAA A(A)基序;对该病毒CP基因的氨基酸序列同源性比对分析与系统进化树分析表明,BaRMV-MJ应是BaRMV病毒的不同分离物,但是CI基因,3’-UTR和部分ORF序列核苷酸及氨基酸序列同源性结果显示BaRMV-MJ是独立于BaRMV病毒的一个新病毒种。。3、通过克隆BaRMV-MJ病毒CP基因,并进行序列分析,成功构建了原核表达载体pET-30a-CP。用纯化的CP融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并利用ELISA和western blot检测并验证了该抗体的可用性,结果表明,该抗体具有较高的效价及特异性,可用于后续检测,为后续云南地区BaRMV的检测及相关研究提供了可靠的检测方法。
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