论文部分内容阅读
免疫学分型在急性白血病(acute leukemia, AL)诊断中具有重要意义。目前在临床上,AL免疫分型主要是通过两种方法实现,一种是借助显微镜观察的人工计数法(免疫细胞化学或免疫荧光方法),另一种是使用流式细胞仪的流式细胞术(flow cytometry, FCM)。前者具有主观性较强、重复性较差、费时且每次只能检测一种抗原(即低通量)等缺陷；而FCM又因仪器与试剂昂贵难以在基层医院推广应用。因此,建立一种具有高通量、使用简便、灵敏度高、经济、准确、客观且易于临床推广的免疫分型新技术具有十分重要的意义。本研究将细胞酶联免疫分析(cell enzyme linked immunosorbent assay, cELISA)技术与电化学分析方法相结合,形成cELISA电化学分析新技术,该技术将cELISA中的酶催化显色反应改为酶催化银沉积反应,再通过电化学分析检测银沉积后电导率的大小来反应抗原量的多少。我们首先研究具有pA级超微电流检测灵敏度的多功能微小新型电化学免疫分析仪。其次,建立一种cELISA酶催化银沉积于插指电极阵列电化学免疫分析(简称为cELISA插指电化学)新方法,并探讨该仪器用于该方法对临床AL标本免疫分型的可行性。最后,探讨该仪器用于电化学阻抗法检测临床AL细胞内髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性的可行性。目的：研究适合于微型电化学传感器超微电流检测的多功能微小新型电化学分析仪。方法：首先,设计硬件电路,包括信号采集放大及转换器、滤波器和短路报警器等电路设计；其次,设计软件程序,包括微控制器程序、通讯软件和上位机软件设计。最后,采用线性扫描伏安法及电化学阻抗法对设计的新型电化学免疫分析仪的性能进行了测试。结果：新型电化学免疫分析仪检测到小于10pA量级的微电流；分析仪产生、显示和记录出阻抗波形图。结论：性能测试结果表明,新型电化学免疫分析仪满足微电流、多功能的设计要求,是一套具有应用价值的高集成度和高精度的微小仪器。目的：探讨新型电化学免疫分析仪用于本研究建立的cELISA插指电化学分析新方法对临床AL标本免疫分型的可行性。方法：在微孔板内,用多聚左旋赖氨酸(Poly-L-Lysine, P-L-L)包被白血病细胞,依次加入鼠抗人一抗及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)标记的马抗鼠二抗,再将银溶液和ALP底物加入到该微孔板内,待溶液中的银离子还原成银单质沉积到插指电极表面后,用新型电化学免疫分析仪测定电导率。首先建立cELISA插指电化学分析新方法,即对实验条件如多聚赖氨酸分子量的大小、抗体的浓度等进行优化及分析cELISA插指电化学分析新方法的特异性、灵敏度及其与FCM的相关性。然后,采用该方法与FCM分别测定72例相同的AL患者白细胞表面分化(cluster of differentiation, CD)抗原,并将这两种方法的检测结果进行比较。结果：最佳P-L-L分子量为7-15万道尔顿；最佳包被细胞数为1.6×105个；最佳一抗体浓度为20μg/ml;1／500为最适二抗浓度；可检测出300个左右的HL-60细胞；cELISA插指电化学分析新方法与FCM方法检测结果相关系数为0.93；经χ2计学分析,72例AL患者8种白细胞CD抗原检测结果与FCM分析结果无统计学差异(P=0.373)。结论：我们创建的cELISA插指电化学分析新方法对白血病细胞株及临床AL标本检测结果与FCM分析结果一致,这表明两种方法吻合程度较高,cELISA插指电化学分析新方法特异性好,灵敏度高,为临床白血病免疫分型提供一种新方法,新型电化学免疫分析仪可望成为临床白血病免疫分型的新仪器。目的：探讨新型电化学免疫分析仪用于电化学阻抗法检测AL髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性的可行性。方法：用Tris-HCL(pH 8.7)溶液裂解白血病细胞,将其滴加到金电极表面,再依次加入过氧化物酶(Peroxidase, POX)染液A和B,用新型电化学免疫分析仪测定催化反应前、后电极的电化学阻抗图,并计算出酶催化反应前、后阻抗实部半径差值。首先,分析电化学阻抗法的特异性；然后,分别用此方法和增强化学发光法分析25例相同的AL患者MPO活性,并将这两种方法的检测结果进行比较。结果：25例AL患者中,电化学阻抗法MPO活性阳性15例,阴性10例；增强化学发光法MPO阳性14例,MPO阴性11例,增强化学发光法检测MPO阳性的14例,电化学阻抗法检测也为阳性,增强化学发光法检测阴性的11例中,1例电化学阻抗法检测为阳性。经χ2计学分析,两种方法检测的阳性率无统计学差异(P=1)。结论：电化学阻抗法与增强化学发光法检测结果一致,这表明两种方法吻合程度好。电化学阻抗法特异性好,灵敏度高,为临床AL标本MPO活性检测提供了一种新方法。新型电化学免疫分析仪可用于该方法检测AL白血病细胞内MPO活性,是一台灵敏度高的仪器。本研究表明,新型电化学免疫分析仪是一台可检测pA量级微电流,支持多种电化学分析方法的多功能灵敏仪器。该仪器不仅可用来检测细胞表面抗原,还可用来检测细胞内MPO活性,且操作简单、携带方便、准确度高,具有临床推广价值和市场应用前景。