【摘 要】
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溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种慢性非特性且易复发的肠道疾病,主要发病部位为结肠与直肠,严重时会扩散至整个结肠。血便和腹泻是UC最早期的症状表现,病情发展严重时会出现腹胀、恶心、呕吐、体质衰弱等现象,最后可能发展成腹膜炎,或是结肠癌等。据流行病学研究统计表明,欧洲、大洋洲和北美等多个国家UC发病人数最多,近年来,在东南亚、非洲和南美洲等发展中国家也呈现患病率递增趋势
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溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种慢性非特性且易复发的肠道疾病,主要发病部位为结肠与直肠,严重时会扩散至整个结肠。血便和腹泻是UC最早期的症状表现,病情发展严重时会出现腹胀、恶心、呕吐、体质衰弱等现象,最后可能发展成腹膜炎,或是结肠癌等。据流行病学研究统计表明,欧洲、大洋洲和北美等多个国家UC发病人数最多,近年来,在东南亚、非洲和南美洲等发展中国家也呈现患病率递增趋势。由于UC患病率逐年递增以及人类社会对其认知度的提高,UC已成为不可忽视的国际性公共卫生问题。尽管现在已有不少药物可用于UC防治,但仍存在早期复发性高、不良反应较多、且极易产生长期耐药性等问题。因此寻找安全、长效的UC治疗药物是十分必要的。当前越来越多的报道已经证实低聚糖可以调节肠道健康,如Galacto oligosaccharides(GOS),Pectin oligosaccharides(POS),Insulin oligosaccharides(FOS),Chitson oligosaccharides(COS)和Mannoseoligosaccharides(MOS)等。韦兰胶(WEILAN GUM polysaccharides,WLG)是鞘氨醇单胞菌分泌的一种胞外多糖,具有良好的稳定性和安全性。本课题以韦兰胶多糖为底物制备了低聚糖,并探索了韦兰胶低聚糖在减轻UC小鼠炎症反应方面的作用效果,进而初步研究了其作用机制,为溃疡性结肠炎的治疗提供了新的治疗思路,论文研究内容如下。首先,我们采用酸解法将韦兰胶多糖原料水解为低聚糖,通过测定低聚糖的还原糖含量、总糖含量以及蛋白含量等理化性质,计算其水解度。最终确定最优水解条件为:底物浓度2%,水解温度110℃,0.2 mol/L三氟乙酸在水解管中酸解3小时,制备低聚糖产物。产物经分离纯化后进行结构表征,通过傅里叶红外(FT-IR)检测和电离子喷雾质谱(ESI-MS)结果显示,韦兰胶低聚糖平均聚合度为2~6,m/z主要集中在381.16-1007.06区间。随后,我们分析了所制备的韦兰胶低聚糖在细胞水平的抑炎活性,采用MTT法测定了Caco-2细胞存活率,并通过LPS诱导构建了Caco-2细胞炎症模型,ELISA结果显示,韦兰胶低聚糖在50μg/m L,100μg/m L和200μg/m L浓度下对Caco-2细胞存活率均无明显影响,但可以使细胞上清中IL-6,IL-β和TNF-α水平分别下降36.85%,33.3%和35%,表明韦兰胶低聚糖可以有效降低LPS诱导的Caco-2细胞中炎性因子水平。最后,我们采用葡聚硫酸钠(DSS)诱导法构建了UC小鼠模型,并从体重损失、疾病活动指数(DAI)、肠道黏膜损伤水平以及炎性因子水平等多个方面探究了韦兰胶低聚糖对溃疡性结肠炎的治疗效果。结果表明,韦兰胶低聚糖高剂量治疗组的小鼠DAI指数下降47%,体重损失减轻了16%,小鼠血清中炎性因子IL-6,IL-1β和TNF-α表达水平分别降低了31%,21%和18%,表明韦兰胶低聚糖可以有效缓解UC小鼠疾病症状。综上所述,本实验制备所得的韦兰胶低聚糖,可以显著降低由LPS诱导的Caco-2细胞中炎性因子表达水平,能够显著缓解DSS诱导的UC小鼠结肠炎症状,增加小鼠体重和结肠长度,改善DAI评分和修复结肠组织损伤,降低UC小鼠血清和结肠组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。本文研究结果初步证明韦兰胶低聚糖可作为UC治疗的良好潜在药物,为进一步开展韦兰胶低聚糖在UC治疗方面的作用机制研究奠定了良好的理论基础。
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