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目的了解青岛地区无偿献血者的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)流行情况及阳性人群特征,探讨检测手段对HBV阳性率的影响,追踪献血者隐匿性HBV感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)情况,分析献血者HBV基因型,以期为无偿献血宣传招募及归队提供数据支持,为青岛地区献血者HBV的认知和防控提供地域性的指导意见。方法2013~2018年青岛市中心血站无偿献血者643771例血液标本通过常规HBV表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)血清学试验和核酸扩增技术(nucleic acid amplification test,NAT)检测,确立HBV阳性献血者;统计学分析HBV阳性献血者与年度、年龄、性别、学历和献血次数(初次献血和重复献血)之间的关系;对部分HBsAg阳性样本通过中和实验进行确认;对部分HBsAg-/HBV DNA+和HBsAg+/HBV DNA+标本进行高精度病毒载量检测和补充乙肝五项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb)检测,并追踪随访,重复检测其病毒载量和乙肝五项;采用PCR直接测序法获得样本中HBsAg编码基因即S基因序列,通过与GenBank中HBV标准序列及共有序列比对,绘制系统进化树,分析病毒基因型别及HBsAg氨基酸变异情况。结果(1)共筛查出HBV阳性标本1624例(0.252%),其中HBsAg+/HBV DNA-892例(0.139%),HBsAg-/HBV DNA+316例(0.049%),HBsAg+/HBV DNA+416例(0.065%)。(2)HBV总阳性率、HBsAg+/HBV DNA-和HBsAg+/HBV DNA+在2015年的阳性率较高(P<0.05);HBV总阳性率和HBsAg+/HBV DNA+阳性率在18-55岁间随年龄增长上升(P<0.05),HBsAg-/HBVDNA+阳性率在18-60岁间随年龄增高呈上升趋势(P<0.05),而HBsAg+/HBV DNA-在<45岁献血者阳性率高,26-35岁最高(P<0.05);HBV总阳性率在性别间差异无统计学意义,但HBsAg+/HBV DNA-阳性率男性低于女性(P<0.05),HBsAg-/HBV DNA+和HBsAg+/HBV DNA+检出率男性高于女性(P<0.05);HBsAg+/HBV DNA-、HBsAg-/HBV DNA+和HBsAg+/HBV DNA+的阳性率均随着学历升高而逐渐降低(P<0.05);初次献血者的HBV总阳性率、HBsAg+/HBV DNA-和HBsAg+/HBV DNA+的阳性率明显高于重复献血者(P<0.05)。(3)HBsAg双试剂阳性样本的确证率明显高于单试剂阳性样本(P<0.05)。(4)62例HBsAg-/HBV DNA+标本HBV病毒载量25例定量阴性,47例定量阳性,其中27例HBV DNA<20 IU/ml,20例>20 IU/mL;12例HBsAg+/HBV DNA+样本均定量阳性,2例HBV DNA<20 IU/ml,10例>20 IU/ml;62例HBsAg-/HBV DNA+标本乙肝五项结果HBcAb+53例(85.48%),其中单独HBcAb+26例(41.94%),HBsAb+/HBcAb+13例(20.97%);32例HBsAg-/HBV DNA+献血者追踪随访发现1例标本两次的结果均为HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+,1例为HBsAg血清转换前窗口期,1例为一过性的HBV感染,其余22例为OBI,7例需进一步确定HBV DNA是否阳性。(5)5例OBI和13例HBsAg+献血者样本成功测序,4例OBI和5例HBsAg+标本为B基因型,1例OBI和8例HBsAg+标本为C基因型。2例OBI样本在HBsAg主要亲水区发生与免疫逃逸和OBI相关位点突变,3例HBsAg+样本在MHR区域也发生突变。结论(1)年龄、学历、是否重复献血、检测手段均影响献血者HBV检出率,应合理招募献血者,加大重复献血者队伍的组建力度,更新检测手段,减低输血风险并避免不必要的献血者流失。(2)HBsAg-/HBV DNA+献血者HBcAb检出率高,病毒载量低,以OBI比率最多;核酸检测与ELISA结合在很大程度上降低窗口期和OBI传播HBV的风险,提升血液安全。(3)青岛地区献血者携带的HBV主要为B型和C型,HBsAg氨基酸突变可能与OBI形成有关。