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目的 研究非瑟酮对高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞(Mouse brain microvascular endothelial cells,BEND3 cells)损伤的影响及机制。方法 1.建立高糖高脂诱导小鼠脑微血管内皮细胞模型。实验分组为:正常对照组、高糖高脂模型组(25 mmol·L-1葡萄糖+200 μmol·L-1棕榈酸)、非瑟酮治疗组(非瑟酮 0.3 μg·mL-1、1.5 μg·mL-1、7.5 μg·mL-1、37.5 μg·mL-1)、(非瑟酮1.5 μg·mL-1、3 μg·mL-1、6 μg·mL-1、12 μg·mL-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)组(20 ng·mL-1)。CCK-8 法检测各组细胞存活率以筛选最佳给药剂量;LDH释放检测法评价非瑟酮细胞毒性;2.免疫蛋白印迹法检测各组细胞凋亡基因蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),BCL2-Associated X 的蛋白质(BCL2-Associated X Protein,Bax)表达情况;3.ELISA法检测各组细胞氧化应激相关指标活性氧(reactive oxygen species,ROS),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2),过氧化氢酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT),诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),基质金属蛋白酶 9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9),一氧化氮(Nitric Oxide,NO),丙二醛(malondialdehyde,MDA),基质金属蛋白酶抑制剂 1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量;4.免疫蛋白印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(epoxy chloropropane Kelch sample related protein-1,Keap1)、核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)、前醌氧化还原酶-1(NADPH:quinone oxidoreductase-1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的表达情况。结果 1.CCK-8法检测结果表明,与正常对照组相比,高糖高脂模型组细胞存活率明显降低至(58.82±2.619)%(P<0.001),与高糖高脂模型组相比,非瑟酮6 μg·mL-1组小鼠脑微血管内皮细胞的存活率最高,为(73.73±5.891)%(P<0.001),其中阳性对照组小鼠脑微血管内皮细胞的存活率为(76.19±2.623)%(P<0.001);LDH检测结果显示,与高糖高脂模型组相比,非瑟酮1.5 μg·mL-1、3μg·mL-1、6μg·mL-1、12μg·mL-1组小鼠脑微血管内皮细胞的LDH含量梯度降低,其中非瑟酮6 μg·mL-1组小鼠脑微血管内皮细胞的LDH含量最低,为0.36±0.24 U/L(P<0.001)。非瑟酮6μg·mL-1为最佳给药剂量。2.凋亡因子表达结果显示:与正常对照组相比,高糖高脂模型组Bcl-2/Bax比值降低至0.25±0.1(P<0.001);与高糖高脂模型组比较,非瑟酮6μg·mL-1组Bcl-2/Bax 比值显著上调至 0.59±0.23(P<0.05);3.氧化应激相关指标检测结果显示:与空白对照组相比,高糖高脂模型组氧化应激因子 ROS,MMP-2,iNOS,MMP-9,NO,TIMP-1,MDA 含量显著升高(P<0.01),SOD,GSH-Px,CAT含量均降低(P<0.01);与高糖高脂模型组相比,非瑟酮作用后RO S/NO/iNO S/MMP-2/MMP-9/TIMP-1/MDA表达趋势明显降低(P<0.01),SOD/CAT/GSH-PX 含量显著上调(P<0.01);4.Keap1/Nrf2/ARE通路蛋白表达检测结果显示:与空白组相比,高糖高脂模型组Nrf2胞浆蛋白表达减少,少量Nrf2转移到核内(P<0.01);非瑟酮作用后Nrf2胞浆蛋白表达降低,细胞内Nrf2蛋白表达发生核移位(P<0.05),NQO1、HO-1蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01);结论 1.6 μg·mL-1、12 μg·mL-1非瑟酮对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤有保护作用,其中6 μg·mL-1非瑟酮效果最佳;2.非瑟酮增加高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞内细胞相关凋亡基因Bcl-2/Bax蛋白表达比值;3.非瑟酮改善高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤,可能与抑制细胞内源性ROS的产生有关;4.非瑟酮可能通过调节细胞内抗氧化酶活性和氧化应激水平,改善糖尿病脑微血管细胞损伤;5.非瑟酮促使Nrf2蛋白核转移,激活Nrf2下游相关抗氧化应激基因蛋白,进而发挥其抗氧化作用。