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ZD制剂是治疗马属动物肢蹄非开放性软组织损伤的经典处方,由12味中药组成,前期试验表明ZD制剂在体外细胞炎症模型中可抑制IL-1β、IL-6、IL-8的含量,但ZD制剂对其他炎症因子的影响还未进行研究。本实验通过使用脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞构建体外细胞炎症模型,观察ZD制剂对相关炎症因子的影响,对ZD制剂抗炎作用的分子机制进行初步研究。(1)通过MTT法和ELISA法检测ZD制剂对细胞炎症模型中TNF-α含量的影响及对TNF-α诱导L929细胞死亡的影响。结果显示,ZD制剂可抑制细胞炎症模型中TNF-α的含量,同时也能够抑制TNF-α对L929细胞的毒性。(2)通过RT-PCR、Western Blot、ELISA法分别检测ZD制剂对小鼠巨噬细胞COX-1和COX-2 mRNA、蛋白表达及含量的影响。结果显示,ZD制剂可抑制COX-2 mRNA的表达、COX-2蛋白表达及COX-2的含量;但对COX-1mRNA、蛋白表达及含量未见明显影响。(3)通过ELISA法检测ZD制剂对体外细胞炎症模型中cAMP、cGMP及PDE的含量影响并计算对cAMP/cGMP比值的影响。结果显示:ZD制剂能够提高cAMP的含量和cAMP/cGMP比值,同时可抑制PDE的含量,对cGMP含量则未见显著影响。结论:(1)通过ZD制剂对小鼠腹腔巨噬细胞Raw264.7及小鼠成纤维细胞L929的毒性试验可知,ZD制剂毒性很小,在实验浓度下可安全应用于细胞。(2)炎症发生期ZD制剂可有效抑制炎症细胞中TNF-α的含量,炎症发展期可通过有效降低细胞中TNF-α的活性来达到抗炎目的。(3)ZD制剂可通过有效抑制炎症发生期COX-2 mRNA、蛋白的表达及其含量来达到抗炎目的。(4)ZD制剂对于非甾体药物普遍非特异性抑制靶点COX-1未见抑制作用,对COX-1 mRNA、蛋白表达及其含量均无明显影响。(5)ZD制剂可有效抑制炎症发生期炎性细胞中PDE含量,同时可有效提高c AMP的含量和cAMP/cGMP比值来起到抗炎的作用,但对cGMP含量未见明显影响。