【摘 要】
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目的:甲状腺癌是当前临床中一种常见原发于内分泌系统的肿瘤。根据国际卫生组织公布的相关数据信息可知,近年来,世界范围内该肿瘤的发病率呈现逐年递增态势,且患病人群逐渐呈现低龄化特点。甲状腺癌在女性患癌群体中占比为5-10%。甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer,PTC）是甲状腺癌的一种亚型,在甲状腺癌中该亚型的占比超过90%。临床研究显示甲状腺乳头状癌患者在接受正规治疗后预
【基金项目】
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国家自然科学基金（81902726）；
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目的:甲状腺癌是当前临床中一种常见原发于内分泌系统的肿瘤。根据国际卫生组织公布的相关数据信息可知,近年来,世界范围内该肿瘤的发病率呈现逐年递增态势,且患病人群逐渐呈现低龄化特点。甲状腺癌在女性患癌群体中占比为5-10%。甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer,PTC）是甲状腺癌的一种亚型,在甲状腺癌中该亚型的占比超过90%。临床研究显示甲状腺乳头状癌患者在接受正规治疗后预后较好,五年生存率超95%。但仍有部分患者经过系统治疗预后较差,主要表现为复发、转移等,已有的研究数据表明,这类甲状腺乳头状癌患者十年生存率低于40%。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）相较于其他RNA而言不具备蛋白质编码功能。已有的研究表明lncRNA的表达与人体多种疾病的产生和发展有关。长链非编码RNA属反义RNA范畴。最新的文献报道AGAP2-AS1能在多种肿瘤如胃癌、乳腺癌、非小细胞肺癌发挥促进肿瘤发生发展的作用。在本篇文章中就甲状腺乳头状癌中AGAP2-AS1的表达差异及其在肿瘤细胞生长和增殖以及对于细胞的迁移及侵袭能力的影响机制进行了说明和研究。同时进一步论证AGAP2-AS1调控细胞因子引发促癌作用的具体机理,并阐明其调控MMP2的具体机制。方法:1、收集中国医科大学附属第一医院在2016年5月-2017年5月经临床诊断为甲状腺乳头状癌且行手术切除术的110例患者甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织,同时统计每位患者的预后信息等临床治疗相关病理资料。2、利用q RT-PCR对所有样本组织中的AGAP2-AS1的表达情况进行了统计,同时基于卡方检验对甲状腺乳头状癌组织中AGAP2-AS1表达水平和患者临床病理资料之间的相关性进行了分析。转染si-AGAP2-AS1并根据已知AGAP2-AS1的表达水平,通过q RT-PCR对干扰效率进行计算。利用CCK8可对AGAP2-AS1影响甲状腺乳头癌细胞的生长情况进行验证,通过Transwell实验,验证其对甲状腺乳头状癌细胞迁移及侵袭的影响情况3、利用western blot检测下调AGAP2-AS1后MMP2的表达。4、使用q RT-PCR检测NC组及si-AGAP2-AS1组的miRNAs表达水平,随后对AGAP2-AS1结合的miRNAs进行筛选。miRNA过表达,同时利用western blot检测MMP2表达水平的变化情况。5、利用q RT-PCR就40对甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中miR-424-5p表达进行检测。利用spearman检验对40例甲状腺乳头状癌组织中AGAP2-AS1和miR-424-5p表达水平相关性进行检测。6、利用萤光素酶报告基因验证miR-424-5p是否可与AGAP2-AS1和MMP2的3’UTR结合,AGAP2-AS1是否可竞争性结合miR-424-5p继而对MMP2的表达进行调控。结果:1、AGAP2-AS1在甲状腺乳头状癌细胞中的表达水平相较于配对的癌旁组织中的表达更高,且该调控因子在甲状腺乳头状癌中的表达与TNM分期等有关。2、在甲状腺乳头状癌细胞中抑制AGAP2-AS1可对甲状腺乳头状癌细胞的迁移及侵袭能力产生影响,同时有效改变与甲状腺乳头状癌迁移相关调控因子的表达。3、miR-424-5p在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平相对癌旁组织更低。在甲状腺乳头状癌细胞中过表达miR-424-5p能抑制癌细胞的增殖能力和转移能力。4、利用targetscan预测了16个miRNAs可能与AGAP2-AS1和MMP2相结合。q RT-PCR进行验证发现miRNA-106b-5p、miRNA-20a-5p、miRNA-29b-3p、miRNA-4270、miRNA-424-5p和miRNA-17-5p可能与AGAP2-AS1结合。在甲状腺乳头状癌细胞中过表达miRNA-106b-5p、miRNA-29b-3p、miRNA-4270、miRNA-424-5p和miRNA-17-5p,发现在TPC1及K1细胞系中过表达miR-424-5p后下游的MMP2蛋白表达显著下降。5、萤光素酶报告基因显示miR-424-5p可与AGAP2-AS1、MMP23’UTR结合且过表达AGAP2-AS1能结合miR-424-5p最终实现对MMP2表达水平的调控。6、过表达miRNA-424-5p可降低PTC细胞的迁移及侵袭能力,同时转染si-AGAP2-AS1及miRNA-424-5p inhibitor可部分挽救si-AGAP2-AS1对PTC细胞迁移及侵袭能力的抑制。结论:lncRNAAGAP2-AS1通过与miR-424-5p特异性受体竞争性结合继而对细胞内的MMP2表达水平进行控制,这是影响甲状腺乳头状癌的转移和侵袭的因素之一。
其他文献
目的:在哺乳动物睾丸中,位于生精上皮基底膜（BM）附近的血睾屏障（BTB）对精子发生至关重要。BTB由相邻的支持细胞（Sertoli细胞）连接而成,将生精上皮分为靠近基底膜的“基底室”和靠近生精小管管腔的“近腔室”,为精子发生提供了免疫屏障。BM主要由Ⅳ型胶原蛋白、层粘连蛋白、肝素糖蛋白和巢蛋白组成。Ⅳ型胶原蛋白是基底膜的重要组成成分,啮齿类动物的睾丸中Ⅳ型胶原蛋白主要是由3条α3链组成的三螺旋结
实验目的通过观察蛋氨酸脑啡肽（Methionine Enkephalin,MENK）对体外人鼻咽癌CNE2细胞增殖、迁移侵袭的抑制作用以及对体内荷CNE2瘤裸鼠的肿瘤形成时间、大小、生存率的影响,分析其结果,进而对可能的机制进行rescue验证,探讨MENK对人鼻咽癌CNE2细胞生物学行为的抑制作用及其可能的作用机制,继而为鼻咽癌的治疗提供新的思路。实验方法一、MENK在体内及体外抑制人鼻咽癌CN
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目的:心血管疾病是影响老龄化社会健康问题的主要原因。衰老是心血管疾病发生的一个主要危险因素,在心血管疾病的发生和发展过程中长期存在。心脏衰老的典型特征是心肌细胞肥大、心肌间质纤维化、炎症细胞浸润和心肌持续性僵硬;这些改变是由心肌细胞以及心肌间质细胞基本功能变化引起的。研究老年心脏衰老及其发生机制,探讨在心脏衰老过程中的关键因子,可以为临床治疗提供新的靶点,具有十分重要的意义。异种共生就是利用年轻化
研究背景:原发性肝细胞肝癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）（下文以肝癌代称）,从全球范围来看,其发病率和死亡率分别处在第五和第四位,是消化系统比较常见、后果较为严重的疾病之一。HCC发生的危险因素包括病毒感染、酒精过量、黄曲霉素及代谢相关脂肪性肝病等多种因素,过去的几年间,人们在肝癌诊断和治疗方面飞速进步,但并未有效的改善预后效果,所以揭示出HCC的发生和发展的具体机制
目的:肾透明细胞癌（RCC）是泌尿系统的第二大常见肿瘤,在世界范围内约占新发肿瘤总数的3%。超过90%的肾肿瘤为肾细胞癌,此类癌症起源于肾近曲小管上皮。在肾细胞癌的诸多亚型中,肾透明细胞癌（ccRCC）最为常见,约占总数的70%-80%,同时在病理上也是侵袭性最强的一种。蛋白酶功能的改变与肿瘤进展息息相关。蛋白酶作为ATP依赖性酶,有着半胱天冬蛋白酶样、胰蛋白酶样及糜蛋白酶样活性,能够对泛素化蛋白
前言:软骨肉瘤是一种比较常见的恶性骨肿瘤,约占全部原发恶性骨肿瘤的9.2%,发病率仅次于骨肉瘤,平均发病年龄在50岁左右,男性略多于女性（55%:45%）。软骨肉瘤包括多种亚型,其中传统型/经典型软骨肉瘤约占85%,其它亚型包括去分化型、透明细胞型、皮质旁型、黏液型、间叶型软骨肉瘤及恶性软骨母细胞瘤。传统型软骨肉瘤的5年生存率约为70%,广泛手术切除肿瘤是目前的主要治疗方法,因肿瘤基质丰富、血运匮
目的:随着RNA测序和生物信息学技术的发展,环状RNA已被证实在人类细胞中具有多种功能。许多研究报道了环状RNA在胃癌中的表达谱发现其在调控细胞功能方面具有潜在的价值,并在胃癌的发生和发展过程中发挥重要作用。Hsa＿circ＿001988作为环状RNA,已有文献报道其参与结肠癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和肾透明细胞癌的调控。但hsa＿circ＿001988在胃癌中的作用尚无报道。此外,更多的证据表明环
目的:动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是导致组织器官缺血的重要原因,是心脑血管及外周血管最常见的病理改变。动脉硬化闭塞症（atherosclerosis obliterans,ASO）是一种血管外科临床工作中常见的外周血管疾病（peripheral arterial disease,PAD）,近年来发病率逐渐升高。下肢动脉出现粥样硬化后,随着病情进展,管腔逐渐缩小,导致组织缺血
目的:矿物粉尘诱导基因mdig作为一种新发现的肺癌相关基因,具有促进肿瘤细胞增殖的作用。脉管（血管与淋巴管）新生在肿瘤的发生发展过程中起关键作用。随着肿瘤细胞迅速增殖,瘤体内部形成局部低氧微环境,进一步刺激肿瘤的脉管生成。其中,VEGF家族是调控肿瘤脉管新生最为重要的蛋白之一。因此,本实验旨在探讨mdig能否调控VEGF家族的蛋白表达,进而影响非小细胞肺癌脉管的生成。研究方法:研究的第一部分:探讨